目的 本课题拟在前期工作基础上，并对威灵仙水提物中不同成分的类别进行研究，并初步建立不同成分部位的制备方法，为后续研究提供样品。方法 考察不同溶剂提取威灵仙药材的效果，建立HPLC分析方法确定提取方法，对威灵仙提取物主要化学成分进行理化鉴别研究，以及初步利用大孔吸附树脂对威灵仙提取物进行静态吸附和动态洗脱的研究。结果 研究结果表明，水提取效果明显优于另外两种溶剂；由静态吸附与动态洗脱确定威灵仙水提取液的洗脱梯度依次为去离子水、20%乙醇、50%乙醇。结论 初步确定了威灵仙水提取物不同成分部位的制备方法，为后续研究提供了指导。关键词 威灵仙，水提物，分离纯化，制备方法
目 录
1 引言 1
1.1 威灵仙研究进展概述 1
1.2 威灵仙分离纯化研究进展 2
1.3 论文研究目的与意义 3
2 实验部分 4
2.1 试验药材 4
2.2 实验试剂 4
2.3 实验仪器 4
2.4 HPLC分析方法 5
2.5 提取方法考察 5
2.6 水提物主要成分的鉴别 6
2.7 大孔吸附树脂的分离 7
3 实验结果与讨论 8
3.1 威灵仙提取物的HPLC分析 8
3.2 理化鉴别研究 9
3.3 大孔吸附树脂饱和容量 9
3.4 大孔吸附树脂静态吸附 10
3.5 大孔吸附树脂动态洗脱 11
结论 14
致谢 15
参考文献 16
1 引言
威灵仙是一种常用药用植物，其化学成分复杂，药理作用广。2015版《中国药典》规定威灵仙主要来源于毛茛科植物威灵仙、棉团铁线莲或者东北铁线莲的干燥根及根茎，具有祛风除湿，通络止痛、肢体麻木、筋脉拘挛、屈伸不利等功效。另外，随着对威灵仙的研究日益深入，临床上已使用多种威灵仙剂型用于治疗各种疾病，例如注射剂、软膏、喷雾剂等，具有镇痛、治疗胆结石、抗肿瘤等药理作用。
威灵仙中成分复杂，包括总皂苷、生物碱、黄酮及多糖等，和各类挥发性成分。现多以水为提取溶剂，其提取物 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
药理作用广泛，本实验主要是通过在前期工作的基础上，对威灵仙水提物中不同成分的类别进行研究，并初步建立不同成分部位的制备方法，为后续研究提供研究科学依据。
1.1 威灵仙研究进展概述
1.1.1 皂苷类化合物
五环三萜类齐墩果烷是威灵仙中的主要皂苷，Mimaki Y等[1]从威灵仙根中提取分离得到5个新的齐墩果酸类三萜皂苷和3个已知皂苷并鉴定了其结构。威灵仙总皂苷是威灵仙药理活性的主要部位，近年来，许多研究表明，威灵仙总皂苷在抗类风湿关节炎[2]、镇痛[3]、抗肿瘤[4]、抗炎止血[5]等方面有着重要的作用。
1.1.2 黄酮类化合物
董彩霞等[6]等利用溶剂提取、硅胶色谱、HPLC技术从棉团铁线莲的干燥根及根茎中分离得到12个黄酮类化合物，包括染料木素、鸢尾苷、芒柄花素、大豆素、甘草素、槲皮素等。Shi S P 等[7]从东北铁线莲中分离得到3个新的酚苷化合物: Clemomandshuricosides A、B、C。此外还有1个简单酚酸类化合物：4(2羟乙基)苯1,2二醇。
威灵仙中黄酮类、酚类等化合物具有降压延缓老年斑形成的作用[8]。此外，威灵仙黄酮类成分具有利胆的作用，单次或多次给药均可促进大鼠肝胆汁分泌，同时威灵仙可通过降低血清胆固醇浓度预防胆结石的形成[9]。
1.1.3 生物碱类化合物
青藤碱是威灵仙生物碱类化合物之一，具有镇痛的药理作用，但镇痛药理作用比吗啡弱，且镇痛作用时间较短，目前还没有报道证明青藤碱能够产生类似吗啡的致瘾综合症。
1.1.4 多糖类化合物
威灵仙中糖类广泛存在，主要是指与三萜类，白头翁素、甾醇类、蛋白质等结合的多糖或寡聚糖[10]。
威灵仙中糖类的生物活性复杂多样，但是目前研究的主要是其抗肿瘤活性和对免疫器官的作用[11]。陈彦等[12]研究表明，威灵仙多糖在体内和体外均具有明显的抗氧化作用。此外，威灵仙中的多糖对人舌鳞癌细胞的生长具有显著抑制作用[13~14]。
1.2 威灵仙分离纯化研究进展
1.2.1 皂苷部位
三萜皂苷的分离通常采用分配柱色谱法，此外，薄层色谱也可用于三萜皂苷的分离。总皂苷中常因含有亲水性色素等杂质，在用薄层色谱寻找最佳分离条件时，通常得到的是一条直线，而不是分离度较好的斑点。在使用硅胶等色谱法分离得到较纯的皂苷中常常掺杂一些杂质，可采用Sephadex LH20,以MeOH等为洗脱剂进行纯化。因此，常常将多种分离方法结合对皂苷进行分离。
大孔吸附树脂利用的是其吸附性和分子筛性原理，有机化合物可根据其极性及分子量大小的不同，使用一定的溶剂洗脱进行分离。徐先祥等[17]利用D101型大孔吸附树脂考察乙醇体积分数对洗脱的影响，以威灵仙总皂苷洗脱率为指标，当用水洗脱除去水溶性杂质，再用50%乙醇洗脱威灵仙中的总皂苷为最佳工艺。1.2.2 黄酮部位
黄酮苷类及其极性较大的苷元一般可用水、乙醇、乙酸乙酯或者极性较大的混合溶剂进行提取，黄酮类化合物为威灵仙中的对热敏感的一类化合物，因此超声提取是提取黄酮类物质的首选方法。对得到的粗提取物还可采用微波提取法[18]、热浸提法[19]、乙醇回流法和水提法[20]等进行精制处理，达到纯化的目的。
郝宁等[21]采用单因素和正交试验相结合的方法优化超声波分离纯化威灵仙中总黄酮的工艺参数，考察乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取温度、超声功率及提取次数对黄酮含量的影响，确定威灵仙总黄酮分离和纯化最佳工艺。
黄酮类化合物通常采用柱色谱法、pH梯度萃取法等方法进行分离纯化。王晓林等[22]采用大孔吸附树脂的工艺，采用静态吸附/解吸和动态吸附/解吸相结合的方法，以解析率为评价指标，考察树脂型号、药液质量浓度及pH值、洗脱剂体积分数及用量对东北铁线莲中总黄酮分离纯化工艺的影响，确定了威灵仙黄酮类化合物采用大孔吸附树脂进行分离纯化的最佳工艺。
1.2.3 多糖部位

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/zygc/67570.html