威灵仙水溶性标示成分的研究
目 录
1 引言 1
1.1 威灵仙质量控制的现状 1
1.2 威灵仙总皂苷的提取方法 1
1.3 威灵仙皂苷及其结构鉴定 2
1.4 大孔树脂分离纯化方法 3
1.5 论文研究目的与意义 4
2 实验部分 4
2.1 材料及试剂 4
2.2 仪器 5
2.3 HPLC分析条件 5
2.4 HPLC制备条件 6
2.5 实验 6
3 结果与分析 7
3.1 HPLC谱图分析 7
3.2 共有峰的标定 8
3.3 共有成分纯化制备 8
3.4 共有成分结构鉴定 9
3.5 共有成分结构验证 10
结 论 12
致 谢 13
参 考 文 献 14
1 引言
中药的功效不仅来源于单一的活性化学成分，而且是活性化学成分的组合，甚至是活性成分与一些非活性成分的相互作用。现有的中药研究水平对大多数中药中的活性成分仍缺乏明确的认识，使得中药质量控制问题一直是中药产研发展的瓶颈问题。基于这一研究现状，中药往往采用标示成分作为质量控制的指标。中药的标示成分是指能用于评价中药内在质量的质量评价指标[1]。目前中药的质量控制逐步由无指标过渡到单指标再到多指标成分[2]，即控制中药材中一种至多种标示成分的量来衡量中药材的内在质量。测定中药标示成分的含量在一定程度上可以反映药材的质量，为药材的质量控制和质量评价提供依据。因此，标示成分选择的科学性很大程度上决定了中药质量控制的科学水平。
1.1 威仙灵质量控制的现状
威灵仙是一种重要 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥
的中草药，属于毛茛科铁线莲属多种植物的干燥根及根茎。长期以来，中药威灵仙的产地复杂，基源较为混乱。其分布区域较广，主要分布于安徽，甘肃，东北，贵州，四川，云南等各省区，而且不同时期以及不同地域的威灵仙在形态，性状等方面差异很大。因此，给威灵仙的质量控制带来许多难题。
威灵仙的主要活性成分为三萜皂苷类，而三萜皂苷的主要皂苷元为齐墩果酸和常春藤皂苷元。在2015年版《中国药典》中，选择齐墩果酸[3~6]进行含量测定。这是由于齐墩果酸主要由三萜皂苷类水解而得。因此，采用Agilent 1100HPLC仪，色谱柱为Hypersil ODS柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相：甲醇0.1%磷酸溶液(83:17)，流量：1.0 mL/min，进样量：20 μL，柱温：25 ℃，检测波长：210 nm，测定齐墩果酸的含量，在一定程度上可反映其皂苷的含量。
1.2 威灵仙总皂苷的提取方法
传统的提取方法具有周期长，提取不完全，产率低等缺点，因此选择合适的提取方法对于威灵仙总皂苷的研究具有重要意义。
1.2.1 回流提取法
童敏等人[7]采用乙醇回流提取，通过均匀设计考察总皂苷的提取效果，得到最佳提取工艺：采用浓度为66%的乙醇，料液比为1:20，回流提取2次，每次30分钟，总皂苷得率为18.81%。
1.2.2 超声提取法
牛江进等人[8]分别对乙醇体积分数，超声提取时间，料液比三者进行单因素试验，分析以上三个因素分别对总皂苷提取率的影响，然后采用响应面法对上述三参数进行优化，得到最优提取条件：采用体积分数为80%的乙醇，料液比为1:30，超声提取50分钟，总皂苷得率为15.78%。解红霞等人[9]采用响应面法对乙醇浓度，超声提取时间，料液比三个参数进行优化，得到最优提取条件：采用浓度为80%的乙醇，超声提取60分钟，总皂苷得率为8.368%。郝宁等人[10]采用响应面法对毛蕊铁线莲总皂苷的提取工艺进行优化，得到最优提取条件：采用体积分数为72%的乙醇，料液比为1:23，超声提取54分钟，总皂苷得率为20.684%。不难发现，[8，10]的主要影响因子相同，因此可以从乙醇体积分数，料液比，超声提取时间等影响因子着手来优化总皂苷的提取工艺。
1.2.3 微波提取法
钟方丽等人[11]对微波提取时间，微波提取次数，微波功率，料液比，乙醇浓度进行单因素试验，分析以上五个因素分别对总皂苷提取率的影响，设计正交实验，得到最优提取条件：采用浓度为70%的乙醇，500 W的微波功率，料液比为1:15，微波提取2次，每次15分钟，总皂苷得率为2.88%。
1.3 威灵仙皂苷及其结构鉴定
1.3.1 威灵仙中的三萜皂苷类
铁线莲属植物中的三萜皂苷苷元主要为齐墩果酸和常春藤皂苷元[12，13]，在苷元的3位和28位大部分均连有糖链的双糖链苷，只有一些糖苷是3或28葡萄糖苷的单糖，并且一些皂苷在糖链上具有乙酰基（AC），咖啡酰基(CA)，异阿魏酰基(IF)，对甲氧基桂皮酰基(MC)和3，4二甲氧基桂皮酰基(DMC)取代基等。
图1 铁线莲属植物中的三萜皂苷的苷元及糖链上的取代基
1.3.2 NMR谱特征
以五环三萜皂苷的共同特征为依据，根据CNMR中高场处甲基个数以及C23位化学位移值判断三萜皂苷元的类型[14]；根据C3，23，28位化学位移变化判断苷元连接糖的位置；结构中糖的种类可通过酸水解HPLC法鉴定等。孙凤等人[15]根据理化性质及光谱特征来分析鉴定结构，鉴定结果为：7个三萜皂苷和1个木脂素，其中三萜皂苷除了1个为单糖链苷外，其余6个为二糖苷，其中齐墩果酸2个，常春藤4个。
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