目的对铁皮石斛多糖进一步进行分离纯化，优化出铁皮石斛粗最佳纯化工艺参数。对铁皮石斛多糖的分离纯化及其纯化组分的初步理化性质进行研究。方法以分离度为指标，分别从洗脱剂浓度、上样流速、上样量三个方面进行动态试验，优化出最佳纯化工艺参数。用硫酸-苯酚法测定其总糖含量，用考马斯亮蓝法测定其蛋白质含量，用硫酸咔唑反应测定其糖醛酸含量。与碘-碘化钾反应反应，检测是否为非淀粉类物质。结果当上样量为100 mg，上样流速为1.12 mL/min，洗脱剂浓度为纯水和0.1 mol/L的以硼酸盐缓冲溶液为溶剂的NaCl溶液时分离纯化效果最佳，能最大程度的收集两个组分。两组分与碘-碘化钾反应均呈阴性，为非淀粉类多糖。组分Ⅰ中总糖所占百分比为94.10%，蛋白质所占百分比为0.51%，糖醛酸含量为4.81%；故组分Ⅱ中糖所占百分比为97.42%，蛋白质所占百分比为0.37%，糖醛酸含量为0.83%。关键词 铁皮石斛多糖，分离，纯化，理化性质
目 录
目录 Ⅰ
1 引言 1
1. 1 铁皮石斛多糖的纯化 1
1. 2 铁皮石斛多糖的初步理化性质 2
2 课题研究的目的及内容 2
2. 1 课题研究目的 3
2. 2 课题研究内容 3
3 实验材料与方法 3
3. 1 实验材料及仪器 3
3.2 铁皮石斛多糖的提取 4
3.3 铁皮石斛多糖的纯化 4
3.4纯化组分的初步理化性质研究 6
4 结果与分析 8
4.1 纯化条件优化 8
4.2纯化组分的初步理化性质研究 13
结论 17
致谢 18
参考文献 19
1 引言
铁皮石斛是我国久享盛名的名贵常用中药之一，被历代医家尊为养生佳品。素来有“药中黄金”的美称，民间称它为“救命仙草”[1]。道家的医学经典《道藏》里将铁皮石斛列为了“中华九大仙草”之榜首，《神农本草经》里将铁皮石斛列为了具有“轻身延年”作用的圣药。铁皮石斛的主要成分就是多糖[2]。2010 年版《中国药典》规定其药用部位为茎,叶属非药用部位；但有部分企业将叶与茎混 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: @351916072@ 
合投料,生产保健食品。石斛常以新鲜或干燥茎入药，有生津养胃；滋阴清热；润肺益肾；明目强腰的功效[3]。它所含的多糖是铁皮石斛中最主要的活性物质，具有免疫调节和护肝的作用[4]。我国约有63种石斛属植物，主要分布于华南及西南地区，目前供做药用的石斛属植物有30多种。国内外对石斛的研究也很重视。然而，多糖的提取分离的通用方法为水提醇沉淀，该方法所得多糖其非糖部分虽然含量较低，但其具多分散性，其化学组成、聚合度及分子性状分布不均一及药理活性稳定性差，因此，需要进一步进行分离纯化，为此本文旨在对铁皮石斛多糖的分离纯化及其纯化组分的初步理化性质进行研究。
1. 1 铁皮石斛多糖的纯化
多糖的提取当中，最为简单，常用的方法就是水提醇沉法。然而水提醇沉法所提取的粗多糖里面含有大量的蛋白质、色素等杂质。为了获得较为纯净的铁皮石斛多糖，就得对所提的粗多糖进行纯化，将杂质除去，并进一步的对其进行提纯。
多糖脱色最为常用的方法有活性炭法，双氧水法，以及大孔树脂法等方法。何余堂等[5]用以上三种方法对米玉花丝多糖进行脱色，发现活性炭法和大孔树脂法的脱色率最好，多糖保留有率最高，但溶液中的活性炭很难被清除，故最优方法为大孔树脂法。
最常用的脱蛋白方法则是Sevag法与酶法。Sevag法需要反复多次处理，每次处理都会使得多糖损耗，多糖保留率太低。而酶法虽然多糖保留率高，操作简单，但是蛋白脱出率不高。故常将酶法与Sevag法结合使用。毛英丽等[6]分别用Sevag法，酶法，酶法与Sevag法结合三种方法对葡萄多糖脱蛋白。结果表明酶法与Sevag法结合的蛋白脱除率最高，达到了72.14%，而多糖保留率也达到了89.19%。
经过脱色脱蛋白后的多糖还可进行离子交换色谱法进一步纯化，将中性多糖和酸性多糖分离开来。石斛多糖的纯化大都采用DEAE52阴离子交换树脂柱层板分离。而铁皮石斛多糖多为中性多糖，基本不含有酸性多糖，无法分离出两个组分。故在上柱前先将铁皮石斛多糖溶于用配置好的pH为7.6的硼酸缓冲盐溶液中，使一部分多糖与硼酸根离子进行衍生化从而带上电荷成为酸性多糖。陈栋才[7]将提取的粗多糖经DEAE52纤维素柱层析初步纯化脱色,梯度用去离子水、不同浓度的NaCl洗脱,结果表明去离子水洗脱效果最好,多糖含量最高,将去离子水洗脱出的多糖,进一步用Sephadex G100柱分离纯化,得到纯度更高的均一性纯化多糖。陈松林[8]结合了多种多糖的分离方法，通过DEAE52阴离子交换剂树脂和丙烯葡聚糖柱色谱对铁皮石斛多糖进行多级分离纯化，得到了三种中性多糖和三种酸性多糖。
1. 2 铁皮石斛多糖的初步理化性质
铁皮石斛多糖为灰白色的粉末，可溶于水，溶解度随温度的升高而提高，不溶于乙醇、苯、正丁醇、乙酸乙酯等有机溶剂。水解前与斐林试剂呈负反应，水解后与斐林试剂呈正反应[9]，说明只有水解后才含有还原性糖。与硫酸咔唑反应呈阴性[10]，说明其不含糖醛酸。与碘碘化钾反应反应呈阴性，说明为非淀粉类物质，说明不含糖蛋白。
铁皮石斛多糖是一种酸性杂多糖，由于受到气候环境、栽培管理和物种资源等因素的影响，其其各单糖组成和比例都有所不同。主要由葡萄糖、半乳糖、D甘露糖和阿拉伯糖组成[11]。刘文杰等[12]利用高效液相色谱法分析云南省内不同产地铁皮石斛发现，不同产地的铁皮石斛药材在主要化学成分含量上存在差异，相似度 0.883～0.987。邵尉等[13]研究不同光照条件、采收时间下铁皮石斛茎和叶中多糖、以及甘露糖动态变化规律。其结果表明光照越强叶的多糖含量约多，茎的多糖含量越少；茎中甘露糖含量明显高于叶。杨虹等[14]研究铁皮石斛多糖完全水解产物经硅胶薄层色谱发现主要含有葡萄糖、半乳糖、木糖、以及少量的甘露糖和阿拉伯糖。张蓓蓓等[15]比较西双版纳地区红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎的多糖含量，葡萄糖与甘露糖峰面积比。其结果表明红杆铁皮石斛多糖含量明显高于青杆铁皮石斛，而葡糖糖与甘露糖峰面积比则明显低于青杆铁皮石斛。韩邦兴等[16]用糖谱法结合多元色谱分析比较铁皮石斛功能性多糖结构特征，结果表明铁皮石斛功能性多糖的单糖组成主要为（乙酰）甘露糖和葡萄糖，摩尔比（3.86~6.99）∶1.00，不同铁皮石斛多糖的部分酸水解和酶解产物糖谱特征相似。

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/zygc/67610.html