摘 要龙胆为龙胆科植物，在全国大部分省份皆有分布，其中以秦岭一带的龙胆药效较为突出。目前研究表明秦岭龙胆中含有天然抗氧化剂和抑菌剂－黄酮类成分等。本论文研究以抑菌及抗氧化为检测指标。用80%的乙醇回流提取药材中总黄酮成分。采用滤纸片法,DPPH和ABTS自由基清除率法对秦岭龙胆进行抑菌及抗氧化活性研究.结果显示秦岭龙胆中总黄酮对培养24小时后的四种供试菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和肉毒杆菌）的最小抑菌浓度分别为0.127mg/ml、0.066mg/ml、0.034mg/ml、0.066mg/ml,对培养48小时的四种供试菌的最小杀菌浓度为0.127mg/ml、0.066mg/ml、0.034mg/ml、0.066mg/ml。在抗氧化研究中,黄酮对自由基具有清除作用,随着浓度梯度上升,清除率也增大。目前，有关秦岭龙胆总黄酮抑菌及抗氧化研究少见报道，本实验以期为龙胆的深入研究提供理论基础。
目 录
1绪论 1
1.1研究背景及意义 1
1.2秦岭龙胆的概述 1
1.3秦岭龙胆的化学成分 1
1.4秦岭龙胆在疾病防治方面的疗效 2
1.4.1对肝脏的作用 2
1.4.2对消化系统的作用 2
1.4.3抗炎镇痛作用 2
1.4.4对神经系统的治疗作用 3
1.4.5龙胆有降压作用 3
1.4.6龙胆的抗肿瘤作用 3
1.5秦岭龙胆的研究近况 3
1.6天然抗氧化剂简介 4
1.7天然抑菌剂简介 4
1.8 常见的几种抗氧化方法 4
1.8.1DPPH自由基清除法 4
1.8.2ABTS自由基阳离子的清除法 5
1.8.3羟自由基清除法 5
1.8.4脂质过氧化法 6
1.9常见的抑菌研究方法 7
1.9.1滤纸片法 7
1.9.2牛津杯法 7
2 实验研究 8
2.1试药与仪器 8
2.1.1试药 8
2.1.2仪器和试剂 8
2.1.3供试菌种与培养基 9
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2.2 实验方法 9
2.2.1技术路线图 9
2.2.2秦岭龙胆的预处理 10
2.2.3秦岭龙胆中总黄酮溶液的配制 10
2.2.4BHT和抗坏血酸溶液的配制 11
2.2.5秦岭龙胆中总黄酮的DPPH自由基清除活性的测定 11
2.2.6秦岭龙胆总黄酮对ABTS自由基阳离子清除实验 12
2.3秦岭龙胆中总黄酮对DPPH自由基和ABTS自由基清除能力结果分析 13
2.4秦岭龙胆中总黄酮的抑菌活性测定 15
2.4.1实验菌种的活化 15
2.4.2LB培养基的制备 15
2.4.3菌悬液的制备 15
2.4.4抑菌活性的测定 15
2.4.5最低抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定 16
2.4.6总黄酮的最低抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定表 16
2.5结果与分析 18
结 论 19
参考文献 20
致 谢 22
 1绪论
1.1研究背景及意义
秦岭龙胆又名茱苓草，为龙胆科植物，在全国大部分省份皆有分布，其中以秦岭一带龙胆药效较为突出。龙胆全草皆可药用，味苦，性寒，具有调经活血、清热燥湿、保肝明目、泻肝定惊等功效。李映丽等[1]对秦岭龙胆进行了药品质量检测和定性分析,通过分析得出其中含有黄酮类，三萜类和糖苷类等成分。而其中的黄酮类成分含量较多，有研究人员对其进行大量研究发现它具有加快植物生长繁殖、抑菌和抗氧化等功效。
天然抑菌剂和抗氧化剂是从天然的动植物中提取的，对自然界许多病原微生物都具有广泛的抑菌和灭菌作用。本实验课题采用80%乙醇为提取溶剂,用乙醇回流的方法对秦岭龙胆中的总黄酮成分进行提取,然后将总黄酮成分配制成不同浓度梯度,将其分为两组待测液，分别用作抑菌和抗氧化研究。采用滤纸片法通过观察抑菌圈直径的大小来判断黄酮的抑菌活性，通过计算DPPH和ABTS自由基清除率判断总黄酮抗氧化活性大小。目前，有关龙胆黄酮的抑菌及抗氧化活性研究鲜有报道，本实验以期为秦岭龙胆中黄酮成分的高效利用提供理论依据。
1.2秦岭龙胆的概述
龙胆又名茱苓草,生长在1900~3700m的高山草甸和灌丛中，在全国各省份皆有分布，其中以秦岭一带药效较为突出。龙胆全草皆可药用，味苦，性寒，具有调经活血、清热燥湿、保肝明目、泻肝定惊等功效。
1.3秦岭龙胆的化学成分
苦苷类成分是龙胆科植物的主要活性成分，井上博之等研究人员自50年代以来，对该类成分的化学结构、临床应用等方面作出了大量的研究。王宁[2]
等经多次试验对秦岭龙胆的化学成分做了初步的分析,并且从秦岭龙胆中分离出来了9种化合物,有4类化合物经波谱分析鉴定为:异荭草甙、龙胆苦甙、秦岭龙胆甙A、秦岭龙胆二糖。许多科研人员在实验中发现，龙胆的根和龙胆的根茎中含有黄酮、香豆素、生物碱、鞣质、甾体、环烯醚萜类等成分。
1.4秦岭龙胆在疾病防治方面的疗效
秦岭龙胆具有利胆、利尿、抗炎、抗过敏、抗惊厥、镇静、镇痛、降低体温、降血压、保护肝脏[3]等药理作用。
1.4.1对肝脏的作用
刘占文[4]等通过多次的实验研究，选用大鼠作为实验对象，发现龙胆苦苷能明显降低四氯化碳[5]而引起的急性肝损伤，使大鼠的胆汁流量和红素浓度的增加,说明龙胆苦苷对肝脏[6]起到保护的作用。
1.4.2对消化系统的作用
龙胆经研究发现能显著影响胆汁的分泌量，使其分泌增多。同时有研究发现其胆汁分泌量受到影响与龙胆中所含龙胆苦苷成分有关，龙胆中苦苷的成分可以分泌胃液，使胃液真多，同时增加胃液中游离酸的分泌，增加胆汁的分泌量。
1.4.3抗炎镇痛作用
Hidetoshi Yamada、Rushendhiran Kesavan［78］通过体外实验，由细胞层面出发考虑，验证出龙胆具有抗炎作用。朴慧顺［9］经小鼠体内实验证明了龙胆具有抗炎镇痛作用。龙胆具有的抗炎镇痛作用不仅在实验室得到验证，而且在临床上也被广泛运用治疗各种炎症。1.4.4对神经系统的治疗作用
在对龙胆进行研究时，发现其龙胆苦苷对神经系统的特殊疗效。有研究人员发现龙胆苦苷对6OHDA诱导帕金森病大鼠模型的神经具有保护作用，正是因为这些研究才使得龙胆苦苷可能成为PD神经炎症防治的有效药物［10］。

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