目的本试验是利用高效液相色谱法对给药制剂中YBTXAN含量的方法进行验证。方法 色谱柱Jupiter® C18，300A，250 × 4.6 mm，5 μm（Phenomenex）；柱温40°C；流速1.0 mL/min；进样体积35 μL；流动相A相0.05% 三氟乙酸水溶液，B相0.05% 三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脱；运行时间12 min；自动进样器常温（10°C至30°C）；检测波长UV-210 nm。采用面积外标法计算YBTXAN的含量，并验证方法的系统适应性、储备液核查、系统残留、标准曲线、准确度、精密度、均一性、稳定性，以此来检验方法的可行性。分析结果均满足实验要求，结果方法色谱峰型单一，空白样品在待测物保留时间处无干扰峰或干扰峰对定量下限无影响；YBTXAN浓度在 5 ～ 240 μg/mL 范围内，与峰面积呈良好的线性关系。所测样品准确度均在90%-110%之间，实际测得量的%CV不大于10%。结论该药物在室温放置至少6h，2-8℃放置不少于3天、7天的条件下含量稳定，高效液相色谱方法可行，外标法操作简便，重复性、稳定性、准确度、精密度良好[1]，为供试品药物含量的分析提供方法与稳定性放行文件的支持。
目录
1. 绪论 1
1.1 高效液相色谱的组成及工作原理 1
1.1.1 高效液相色谱的组成 1
1.1.2 高效液相色谱的工作原理 1
1.2 YBTXAN的作用及研究现状 2
1.2.1 YBTXAN在临床研究上的应用 2
1.2.2 YBTXAN的研究现状 2
1.3 试验内容 3
1.3.1 临床前研究的具体内容 3
1.3.2 供试品、参比制剂、对照品的定义 3
2. 材料和方法 4
2.1 主要药品、主要试剂及仪器 4
2.1.1 主要药品 4
2.1.2 主要试剂 5
2.1.3 主要仪器 6
2.2 试剂和样品准备 6
2.2.1 流动相配制 6
2.2.2 稀释液配制 6
2.2.3 对照品储备液配制 7
2.2.4 供试品与参比制剂给药制剂 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
配制 7
2.2.5 标准曲线样品配制 7
2.2.6 质控及定量下限样品配制 8
2.3 分析方法 9
2.3.1 外标法定量 9
2.3.2 液相条件 10
2.4 方法验证 10
2.4.1 系统适应性 10
2.4.2 特异性 10
2.4.3 系统残留 11
2.4.4 标准曲线 11
2.4.5 精密度与准确度 11
2.4.6 提取回收率 11
2.4.7 对照品储备液稳定性 11
2.4.8 供试品与参比制剂原溶液稳定性 12
2.4.9 供试品与参比制剂滤膜内稳定性 12
2.4.10 供试品与参比制剂给药制剂稳定性 12
2.4.11 配制后样品稳定性 13
3. 数据采集及统计分析 13
4. 结论 27
5. 试验中存在问题讨论与分析 30
参考文献 32
致谢 33
1.绪论
1.1高效液相色谱的组成及工作原理
1.1.1高效液相色谱的组成
HPLC仪可分为四个主要组成部分，即：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来[2]。UV 法优点是操作简单、费用低廉，但其灵敏度低、专一性差，容易受到血液中其他成分的干扰；而 HPLC法具有分离度好、灵敏度高、
专属性强、成本较低等优点[3]。
1.1.2高效液相色谱的工作原理
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography  HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对待测样品的分析[4]。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
应当选用高灵敏度，高分辨的色谱柱，可根据样品的分子量范围、溶解度、分子结构等特性来选用合适的柱子。分子量200~2000范围适于用反相柱与正相吸附柱等,而大于2000的则用体积排阻柱，并能初步判定分子量的分布[5]。对于溶于水并能离解的物质可采用离子交换柱。而其它的物质还可以使用对应样品不同特性的专用柱,缩小柱子的内径可提高检出灵敏度和减少样品体积及溶剂消耗量[6]。某公司生产出2x150或250mm的微量柱并用于梯度方法中,发展成微流梯度高效液相色谱,柱子填料同常用分析柱一样,使用方法容易转移[7]。2mm微流柱因内径小,样品稀释减少,流速降低。柱效可达5万塔板数。与4.6mm柱比较,可使检测灵敏度提高5倍,能节省80%的溶剂消耗。
1.2 YBTXAN的作用及研究现状
1.2.1 YBTXAN在临床研究上的应用
YBTXAN治疗能有效改善患者肺功能。具体原因分析如下：YBTXAN是一种强效抗胆碱药物，可作用于支气管平滑肌 M 受体，起到松弛支气管平滑肌作用，可有效缓解患者呼吸困难、咳嗽等症状，同时有报道[11]指出其可作用于支气管黏膜，促进其纤毛运动，利于痰液排出，进而更好地缓解患者呼吸困难情况[9]。
1.2.2 YBTXAN的研究现状
慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary diseases，COPD）是临床上常见的一种呼吸系统疾病，慢性阻塞性肺疾病患者一旦患病就会长期遭受到咳嗽、咳痰、气短，甚至是心肺功能下降等困扰和折磨[12]。不仅给患者的健康带来了极大的危害，同时也给临床治疗带来较大的困扰[13]。
YBTXAN联合沙丁胺醇及布地奈德雾化吸入治疗小儿毛细支气管炎的临床疗效确切，可有效缓解患儿临床症状，缩短住院时间，值得临床推广应用。YBTXAN能够抑制肥大细胞释放炎性递质。有报道称，YBTXAN能够有效减轻气道阻塞，提高血氧饱和度，改善入院24 h 临床评分。在沙丁胺醇 + 布地奈德基础上，联合应用YBTXAN，由于三种药物的药理机制和作用部位不同，联合用药能够充分发挥其各自优势，发挥更加强效、持久的支气管扩张作用。同时，采取雾化吸入方式给药，能够使药物直达气道，直接作用于气道表面发挥效果，或通过黏膜迅速吸收发挥作用，药物起效更快，结合抗炎、平喘等其他治疗，临床疗效更加明显。在氧气雾化吸入治疗过程中，能够使患儿得到充足的氧气供给，湿化气道，促进痰液排出。联用噻托溴铵干粉进行慢性阻塞性肺疾病治疗整体疗效较好，而且整体安全性明显更高[14]。此外，特异性药物总药量小，局部药物浓度高，能够以最小的使用剂量发挥最大的治疗效果[15]。

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