女贞子中多糖的提取工艺优化(附件)
1 绪论
1.1 课题研究背景 1
1.2 课题研究目的与意义 1
1.3 女贞子的主要成分研究 2
1.4 女贞子药理作用研究 2
1.4.1 保护肝脏作用 2
1.4.2 抗氧化衰老作用 3
1.4.3 抗菌消炎作用 3
1.4.4 抗动脉粥样硬化作用 3
1.4.5 调节免疫作用 4
2 实验部分
2.1 实验器材 5
2.2实验方法 5
2.2.1 女贞子多糖的提取 5
2.2.2 检测波长的确定 6
2.2.3 供试品溶液的制备 6
2.2.4 对照品溶液的制备 6
2.2.5 标准曲线的绘制 6
2.2.6 线性范围考察 7
2.2.7 精密度实验 7
2.2.8 稳定性实验 7
2.2.9 重复性实验 8
2.2.10 样品的含量测定方法 8
2.3 单因素考察 9
2.3.1 提取时间对女贞子多糖提取率的影响 9
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br /> 2.2.5 标准曲线的绘制 6
2.2.6 线性范围考察 7
2.2.7 精密度实验 7
2.2.8 稳定性实验 7
2.2.9 重复性实验 8
2.2.10 样品的含量测定方法 8
2.3 单因素考察 9
2.3.1 提取时间对女贞子多糖提取率的影响 9
2.3.2 料液比对女贞子多糖提取率的影响 9
2.3.3 提取次数对女贞子多糖提取率的影响 10
2.4 正交实验 11
2.5 验证实验 12
2.6小结 12
结论 14
参考文献 15
致谢 17
1 绪论
1.1 课题研究背景
女贞子Ligustrum lucidum Ait,为木犀科常绿乔木植物女贞的成熟干燥果实,味甘、苦,性凉,归肝、肾经,具有滋补肝肾,明目乌发的作用,是我国传统的扶正固本的药物,主要用于肝肾阴虚,眩晕耳鸣,腰膝酸软,须发早白,目暗不明,内热消渴,骨蒸潮热等病症 [1] 。目前为止,发现并从女贞子中提取分离出来的化学成分有三萜类、环烯醚萜类、黄酮类、苯乙醇类以及许多水溶性成分,经现代药理学的研究表明,女贞子中的有效成分在增强机体的免疫功能、抗菌消炎、保护肝脏、抗动脉粥样硬化以及抗氧化衰老等方面都具有独特的功效,在抗辐射,降血糖方面都有一定作用,在临床上我们主要将女贞子用于治疗慢性支气管炎以及失眠、高血糖,高血脂等多种疾病。
女贞子是我国野生药材,分布范围较为广泛,主产于华东,中南,西南等地区。长久以来,人们认为女贞子的使用仅仅局限于中药配伍或者中药制剂中,应用范围相对较窄,而且对它的功效了解也比较少,近年来随着我国对女贞子的研究越来越深入,发现了女贞子中的许多活性成分,其具有较好的免疫增强和抗氧化作用,女贞子中活性成分的提取还具有很好的市场前景,因此人们不再局限于女贞子只能用于中药配伍治疗以及制剂中,女贞子中的有效成分提取工艺的研究也变的愈发重要,对女贞子中有效成分的提取工艺研究不仅有利于女贞子资源的合理开发和利用,而且对于研究和开发新药也有一定的帮助。
1.2 课题研究目的与意义
中药及其制剂在对于疾病的治疗方面相对于西药而言安全且毒副作用小,而且目前科学家对于中药的研究越来越倾向于质量标准的控制以及药材中有效成分的含量测定,尤其是药典中还增加了女贞子中特女贞子苷的含量测定,表明女贞子的质量标准研究也变的越来越完善了,女贞子中的水溶性成分也日渐受到众多科学家的重视。
女贞子多糖作为女贞子的有效成分之一,不仅在增强机体的免疫功能、保护受损的肝脏、抗病毒以及抗氧化衰老等方面具有独特功效,而且在抗辐射,降血糖方面也有一定作用。本课题采用水提法对女贞子中的多糖进行提取,并以女贞子多糖的提取率作为评价指标建立含量测定的方法,影响女贞子多糖提取率的因素很多,本课题选取了最主要的3个影响因素即:提取时间,提取次数以及提取时的料液比进行了单因素考察,并在其众多因素水平中选出最佳的提取因素水平条件,最终采用L9(34)正交实验进一步总结优选出最佳的提取工艺,为女贞子资源的开发和合理应用提供理论依据。
1.3 女贞子的主要成分研究
女贞子的化学成分主要有三萜类、环烯醚萜类、黄酮类、苯乙醇类、挥发油类以及多糖类,其中的三萜类化合物,其主要骨架以齐墩果烷型、羽扇豆烷型等为主,化学成分主要是齐墩果酸以及熊果酸以及这两种物质的衍生物α乌索酸甲醋、委陵菜酸、 2α轻基齐墩果酸、3β一反式对轻基肉桂酰氧基一2α轻基齐墩果酸;环烯醚萜类成分主要是裂环环烯醚萜类,包括女贞子苷、女贞酸、特女贞普苷、新女贞苷、异女贞苷、10羟基女贞苷等,裂环环烯醚萜类具有保肝利胆,抗炎消菌、抗肿瘤、降血脂以及增强机体的免疫功能的作用[2];其中分离得到的黄酮类化合物包括木犀草素、芦丁、芹菜素等;女贞子中的苯乙醇大多以苷类存在,主要有对羟基苯乙醇αD一葡萄糖苷, 3,4一二羟基苯乙醇一βD一葡萄糖苷;女贞子挥发油中分离鉴定了50多种成分,其中主要有按油精、苯甲醇、乙酸龙脑酯、丙硫酮、α丁基苯甲醇等酯类,醇类,醚类,烃类成分[3];女贞子多糖也是女贞子的主要成分,主要由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖及岩藻糖4种糖组成[4]。近年来,人们对于多糖的研究越来越深入,是女贞子、黄芪、灵芝等多种中药材的有效成分之一,在对多糖等活性功能进行研究时发现多糖能够增强机体的免疫调节功能,另外还有一定的抗菌消炎、保护肝脏的作用。
1.4 女贞子药理作用研究
1.4.1 保护肝脏作用
李阳等[5]发现女贞了中的主要成分齐墩果酸可以保护损伤的肝细胞,女贞子中的主要成分齐墩果酸对于损伤的肝脏细胞具有保护作用,能显著降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性,对多种肝毒物都有抵抗作用,可以显著减少乙酞氨基苯酚对肝脏的毒害及福诱导的肝损伤[6]。戴颖[7]等通过观察熊果酸对实验性大鼠肝纤维化的影响,发现熊果酸可明显改善肝纤维化大鼠肝功能,并呈剂量依赖性;能显著增加SOD 表达,降低 MDA 表达;可上调 MMP1mRNA 的表达,下调 TIMP1mRNA 的表达。
1.4.2 抗氧化衰老作用
目前研究表明女贞子的提取物具有一定的抗氧化衰老的作用,研究发现人体内存在着能够有效清除自由基的抗氧化酶系统,主要有超氧化酶歧化酶(SOD)以及过氧化脂质(MDA)等,当人体生理机能发生异常时,体内的自由基会显著增多然后会导致机体产生超氧化反应,使细胞的结构和功能发生改变,从而引发一系列的细胞病变,
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