本实验以杭菊叶片为研究材料，进行愈伤组织诱导培养条件的研究并优化其悬浮细胞系培养条件，建立并采用不同茉莉酸甲酯浓度诱导其叶片黄酮类成分积累。以杭菊叶片为外植体材料，按不同愈伤培养条件进行接种，得到的愈伤组织按相同悬浮培养条件进行培养，选择生长良好的悬浮细胞，给予不同浓度的茉莉酸甲酯作为诱导剂继续悬浮培养，最后测定不同浓度诱导下悬浮细胞的总黄酮含量。结果显示，1 mg·L-1 2,4-D+0.2 mg·L-1 6-BA+4.74 g·L-1 MS+30 g·L-1 蔗糖为制备杭菊悬浮细胞系的适宜培养条件，500 μmol·L-1 茉莉酸甲酯对杭菊叶片积累黄酮类成分效果优良。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
实验材料2
植物材料2
实验试剂及仪器2
方法2
外植体选择与消毒2
1.2.1.1 外植体选择2
1.2.1.2 外植体消毒2
愈伤组织培养3
1.2.2.1 愈伤组织接种方式与条件3
1.2.2.2 愈伤组织分组对照与最终选择3
悬浮细胞系培养3
1.2.3.1 悬浮细胞适宜材料与条件的选择3
1.2.3.2 悬浮培养流程3
茉莉酸甲酯浓度梯度设定3
黄酮浓度测定3
2 实验结果4
2.1 愈伤组织的诱导与培养基选择4
2.2 悬浮细胞培养体系的建立6
2.3 茉莉酸甲酯浓度梯度下黄酮浓度的积累情况6
3 讨论7
3.1 愈伤组培初始接种材料的选择与特点7
3.2 植物生长调节剂在愈伤组培和悬浮培养中的影响7
3.3 茉莉酸甲酯对植物体积累总黄酮的影响8
3.4 结果与讨论8
4 致谢8
参考文献9
杭菊悬浮细胞系的建立及茉莉酸甲酯对其叶片细胞中黄酮类成分积累的影响的研究
引言
引言
菊花（ *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
Chrysanthemum. morifolium Ramat.）是菊科菊属多年生宿根草本植物，原产我国， 9～11月花盛开时分批采收，阴干或焙干，或熏、蒸后晒干。药材按产地和加工方法不同，分为亳菊、滁菊、贡菊、杭菊、怀菊。中医认为，菊花性甘、味苦，微寒；归肺、肝经；可散风，平肝明目，清热解毒。临床上菊花主要用于治疗风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花及疮痈肿毒[1]。菊花的药理作用多与其所含有的黄酮类物质有关，其黄酮类物质具有明显的抗炎、抗菌、抗衰老、免疫力调节等作用，是菊花药理活性成分的一个重要组成。
目前国内外菊花的组织培养中，有利用茎段[2]、叶片[3]、叶柄[4]、管状花[5]及花梗等作为外植体实现植株再生的历史，各自具有不同的优势与限制性特点。植物细胞的悬浮培养，因其分散性好，生长迅速，易于控制等优良因素，被广泛应用于细胞学、分子细胞学、生物化学、遗传学等领域。茉莉酸甲酯是与损伤相关的植物激素和信号分子，广泛作用于生长发育相关的生理过程和植物抗性诱导过程[6]，是应用于诱导植物产生次生代谢产物的优秀激素。
本实验在国内外菊花研究的基础上，以杭菊中的“早小洋菊”为研究对象，优化其叶片的愈伤组织诱导培养条件，寻找符合其生长特点的适宜的激素浓度与配比，并以此为基础上进行其叶片细胞的悬浮培养条件优化，在保持其细胞生长势旺盛的条件下给予不同浓度的茉莉酸甲酯作为诱导剂继续悬浮培养，寻找适宜其黄酮类成分积累的浓度。
材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 植物材料
本实验所采用的材料是菊花(C. morifolium)中杭菊品系的早小洋菊，于2017年10月从原杭菊植株上摘离
1.1.2 实验试剂及仪器
NAA，分析纯，郑州建业园林养护用品有限责任公司；6BA，分析纯，广州市林国化肥有限公司；2,4D，分析纯，广州市林国化肥有限公司；茉莉酸甲酯MJ，分析纯，合肥博美生物科技有限公司；蔗糖，分析纯，陇西科学股份有限公司；琼脂，分析纯，上海博微生物科技有限公司。
UV2100分光光度计，上海圣科仪器设备有限公司。
1.2 方法
1.2.1 外植体选择与消毒
1.2.1.1 外植体选择
菊花中不同部分所含的化学成分种类与比例不同，如氨基酸，总氨基酸量分布顺序为：根＞叶＞茎；核苷类成分，总核苷量分布为：叶＞根＞茎；黄酮类，总黄酮量分布为：叶＞根＞茎（其中叶类所含黄酮为9.94%18.66%，根类所含量为5.88%8.02%，茎中所含量为3.98%5.41%），有机酸类，总有机酸分布为：叶＞根＞茎[7]。因为菊花花瓣花蕾的愈伤组培受到季节条件限制，且诱导愈伤率不高，所以不选用花瓣花蕾作为实验材料。综合以上因子，本实验选用菊花的叶片作为愈伤材料。
1.2.1.2 外植体消毒
取杭菊生长旺盛的幼嫩叶片，进行外植体消毒：在超净工作台，先用70%乙醇浸泡30 s，以无菌水冲洗2次，然后用2% 次氯酸钠浸泡10 min，浸泡时不断搅动，最后用无菌水冲洗4次。得到无菌的叶片作为接种用外植体。
1.2.2 愈伤组织的培养
1.2.2.1 愈伤组织接种方式与条件
菊花的愈伤组培培养基以MS和蔗糖为基础，不同研究所用的激素配比与浓度各不相同。参照前人对菊花组织培养的研究：薛建平等在安徽药菊叶片愈伤组织诱导及植株再生技术的研究中使用NAA 0.1 mgL1+6BA 0.11.0 mgL1的激素配比，且证明了叶片背接优于正接的接种效果[8]，苏宝玲等在菊花愈伤组织的诱导研究中使用6BA 2 mgL1+NAA 0.2 mgL1的激素配比诱导九叶菊愈伤[9]，李翠香等在菊花愈伤组织诱导的影响因素研究中使用6BA 2 mgL1+KT 0.5 mgL1的激素配比诱导盆栽菊愈伤[10]，最终确定了本实验中杭菊叶片诱导愈伤组织的培养条件。
1.2.2.2 愈伤组织分组对照与最终选择
消毒后叶片分别背接于四组不同激素配比的培养基中：①2,4D 1 mgL1+6BA 0.2 mgL1；②2,4D 0.2 mgL1+6BA 0.5 mgL1；③NAA 0.1 mgL1+6BA 0.3 mgL1；④NAA 0.1 mgL1+6BA 1 mgL1+2,4D 2 mgL1。避光，25°C培养，15 d换一次新培养基。

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