【目的】建立百蕊草无菌快繁技术体系，为百蕊草的人工栽培提供技术支持。【方法】采集野生百蕊草的种子和茎尖，用酒精和氯化汞消毒后，接种到培养基上，建立百蕊草的无菌系。通过调节激素浓度，探索适合百蕊草产生愈伤组织、愈伤组织培养、侧芽分化、继代培养的培养基。【结果】百蕊草茎尖的最佳消毒时间为酒精30～35s，氯化汞5～6min；诱导愈伤组织的最佳培养基为MS＋1.0 mg·L-1 2,4-D，诱导率为94.07％；适合愈伤组织培养的最佳培养基为MS+0.75 mg·L-1 2,4-D，愈伤组织生长率为158.33％；诱导侧芽分化的最佳培养基为MS＋1.5 mg·L-1 6-BA＋1.0 mg·L-1 NAA，侧芽增殖倍数为7.44；继代培养的最佳培养基为1/2 MS＋1.5 mg·L-1 IBA＋0.5 mg·L-1 6-BA，百蕊草平均生长率最高。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1实验材料2
1.2实验方法2
1.2.1百蕊草种子建立无菌系2
1.2.2百蕊草茎尖建立无菌系2
1.2.3百蕊草愈伤组织的诱导2
1.2.4百蕊草愈伤组织的培养2
1.2.5百蕊草侧芽分化的诱导3
1.2.6百蕊草继代培养的适宜培养基3
2 实验结果4
2.1百蕊草种子适宜消毒时间4
2.2百蕊草茎尖适宜消毒时间4
2.3适宜诱导愈伤组织的培养基5
2.4适宜愈伤组织培养的培养基6
2.5适宜侧芽分化的培养基6
2.6适宜继代培养的培养基8
3 讨论8
3.1茎尖建立无菌系注意事项8
3.2灭菌时间的优化8
3.3继代培养中存在激素毒害9
3.4百蕊草丛生特性9
3.5百蕊草组织培养生根困难9
3.6百蕊草具有一定自养能力9
致谢10
参考文献10
百蕊草无菌快繁技术研究
引 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
言
檀香科半寄生植物百蕊草Thesium Chinese Turcz.[1]，又名百乳草、地石榴，干燥全草为我国民间常用中草药。始载于《图经本草》，具有“清热解毒”、“通顺气脉”、“调气”之功效，味平、微苦，性寒，归脾、肾经，功在清热解毒，补肾涩精。主要用于肺炎、上呼吸道感染、急性乳腺炎、淋巴结结核等，被称为“植物抗生素”[2]。
百蕊草在中国南、北各地及日本、朝鲜均有分布[3]，我国有13种，安徽滁州和江苏茅山地区为百蕊草主要产区。近年来，由于过度采挖和环境破坏，百蕊草栖息地正面临空前威胁，野生资源正在逐年锐减，无法满足用药需求。为了更好地保护百蕊草资源和满足用药需求，进行百蕊草的野生抚育或引种驯化栽培显得尤为迫切，目前对百蕊草的研究多见于生物学特性[4]、寄主植物种类[57]、药理药效[812]、化学成分[1315]、质量评价[16]等方面，尚未解决百蕊草大面积人工栽培的问题。而无菌快繁技术文献结论差异较大，较为混乱，本文对百蕊草快繁技术系统实验，为百蕊草资源人工栽培提供科学依据。
1 材料与方法
1.1实验材料
1.2实验方法
1.2.1百蕊草种子建立无菌体系
挑选粒大饱满、颜色和大小相近的百蕊草种子，装入8×12cm的尼龙种子袋，用自来水冲洗24h，之后将材料放入超净工作台内，紫外灭菌10min，用75％酒精杀菌30s，0.1％氯化汞溶液灭菌4，5，6min，把灭菌后的材料在无菌水中漂洗3次，接种到MS培养基中，每瓶接10粒种子，重复10瓶。接种后的材料放入培养温度为25±2℃的光照培养箱内用锡纸遮光培养。在培养35天时统计发芽种子数，探索是否可以用种子建立百蕊草的无菌系。
1.2.2百蕊草茎尖建立无菌体系
摘取无损伤的百蕊草顶芽，装入8×12cm的尼龙种子袋，用毛刷适当刷洗后，在自来水下冲洗4h，之后将材料放入超净工作台内，紫外灭菌10min，用75％酒精杀菌20，25，30，35，40s，0.1％氯化汞溶液灭菌5min和用75％酒精杀菌30s，0.1％氯化汞溶液灭菌4，5，6，7，8 min，把灭菌后的材料在无菌水中漂3次，接种到MS培养基中，每瓶接一个茎尖，重复10瓶。接种后的材料放入培养温度为25±2℃、光照强度2000～3000lx、光照时长为12hd1的光照培养箱里培养，观察并记录不同时间处理的污染瓶数和死亡瓶数，在培养35天时统计出结果，计算污染率和死亡率，筛选用茎尖建立无菌系时75％乙醇和0.1％氯化汞的理想消毒时间。
1.2.3百蕊草愈伤组织的诱导
挑选长势良好的百蕊草无菌系的叶作为诱导愈伤组织的材料，切成长度0.5～1.0cm，转接到添加不同浓度2,4D的培养基中，每瓶接3片叶，重复15瓶。接种后的材料放入培养温度为25±2℃、光照强度2000～3000lx、光照时长为12hd1的光照培养箱里进行愈伤组织的分化培养。观察并记录不同浓度2,4D对百蕊草愈伤组织分化的诱导状况，在培养35天时统计不同培养基中的愈伤组织数，计算愈伤组织诱导率，筛选诱导愈伤组织适宜的2,4D浓度。配制的培养基以MS培养基为基本培养基，2,4D浓度见表1，不同培养基中基本元素浓度及溶液pH相同。
1.2.4百蕊草愈伤组织的培养
挑选长势良好的百蕊草愈伤组织，切成相同大小，转接到添加不同浓度2,4D的培养基中，每瓶接3块愈伤组织，重复15瓶。接种后的材料放入培养温度为25±2℃、光照强度2000～3000lx、光照时长为12 hd1的光照培养箱里培养，35天后每个处理随机挑取5瓶，从培养基中取出愈伤组织，测量愈伤组织重量，计算平均生长率，筛选愈伤组织继代培养适宜培养基。配制的培养基以MS培养基为基本培养基，不同配方中2,4D浓度见表2，同时控制培养基中元素浓度及溶液pH相同。
表1 愈伤组织诱导培养基
Table 1 The medium of callus inducible

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