【目的】创制万寿菊同源四倍体新种质材料，为高色素含量万寿菊新品种选育提供育种材料。【方法】用万寿菊种子为外植体，消毒建立无菌系，在建立无菌快繁体系的基础上，采用秋水仙素进行同源四倍体种质的创制。【结果】种子萌发诱导培养基为MS+1.0mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA；增殖培养基为MS+1.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA，增殖系数达5.7；生根培养基为1/2MS+0.5mg·L-1NAA；利用秋水仙素诱导万寿菊多倍体种质成活率相对较高秋水仙素浓度是0.05%，浸泡时间是24h。【结论】本实验证明采用植物组织培养技术可以快速诱导万寿菊种子发芽，配合添加生长素(NAA)和细胞分裂素（6-BA）可以建立万寿菊无菌快繁体系。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.2 方法 2
1．2．1 培养条件 2
1．2．2 种子的消毒 2
1．2．3 发芽培养基筛选 2
1．2．4 增殖培养基筛选 2
1．2．5 生根培养基筛选 2
1．2．6 秋水仙素诱导浓度筛选 2
1．2．7 多倍体株系鉴定 2
2 结果与分析 2
2．1 不同消毒时间对万寿菊种子发芽的影响 3
2．2 不同激素浓度培养基对发芽的影响 3
2．3 不同浓度激素配比对增殖的影响 4
2．4 不同激素对万寿菊生根的影响 4
2．5 不同浓度秋水仙素诱导对万寿菊的影响 5
3 讨论 5
3．1 外植体消毒 5
3．2 增殖分化 5
3．3 生根培养 6
致谢 6
参考文献： 6
万寿菊同源四倍体种质的诱导与鉴定
引言
万寿菊为菊科一年生草本植物，其花中富含的叶黄素是较好的抗氧化剂和着色剂之一，可预防视黄斑退化、肿瘤、心血管疾病、加强机体免疫力[16]，而且叶黄素 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
是一种天然的色素，国际上现已普遍将叶黄素用于食品和医药等领域，研究功能性保健食品的开发与生产[7]。万寿菊还可用于饲料、农业等领域[911]，综合各方面因素考虑，万寿菊具有较高的经济价值[8]，随万寿菊材料的广泛应用，万寿菊的供应逐渐出现供不应求的现象[12]。
多倍体植物因其染色体数目的变化易导致形态、生理等遗传特性的变异，一般具有根茎叶的巨大型、抗逆性强、次生代谢含量高等特点[16]。目前，植物多倍体育种以植物组织培养技术与秋水仙素诱导多倍体相结合的方法为基础，现已被广泛应用。植物组织培养技术以植物细胞全能性为基础，利用植物的离体组织器官，如植物的根、茎、叶和花、种子等，培育出完整植株后代的一种生物技术[13]。秋水仙素诱导植物多倍体属于化学诱导法，化学诱导法人工诱导多倍体的主要方法，有研究表明，在众多化学试剂诱导中，秋水仙素诱导的效果最好，且最为广泛应用[14]。
万寿菊作为提取叶黄素的原料之一，在如今供不应求的情况下，如何提高叶黄素的产量很重要[7，17，18]。在生产中采用多倍体育种是万寿菊品种选育的有效手段。本试验利用万寿菊的种子建立万寿菊无菌快繁体系，并采用秋水仙素诱导万寿菊同源四倍体种质，再用根尖细胞染色体鉴定的方法，鉴定筛选出万寿菊同源四倍体种质，以期提高万寿菊植物体内叶黄素成分的含量，使万寿菊作为叶黄素的提取原料可以更好的应用于相关领域。
1 材料与方法
1.1 材料
万寿菊种子，采收于南京中山植物园，播种在大学试验基地，经过向增旭副教授鉴定为万寿菊。
1.2 方法
1．2．1 培养条件
试验过程中的所有转接工作全程在超净工作台上操作，培养温度为25±2℃，光照20004000Lx，每天光照1214h，培养基PH为5.8。
1．2．2 种子的消毒
将种子装入纱网，用流水冲洗2030min，用滤纸吸干水分，与工具一同放在超净工作台上，紫外灭菌30min。试验操作时，将种子浸入75%的酒精30s，无菌水清洗4次，将种子转入0.1%的HgCl2中分别灭菌3min、4min、5min，用无菌水清洗5次，取出种子并置于滤纸上，吸干种子表面的水分，再接入MS培养基，共30粒，见表2。
1．2．3 发芽培养基筛选
将消毒过的种子接在含不同激素种类和浓度的发芽筛选培养基组合中（见表3），每种培养基接种30粒，定期统计各组合出芽早晚、不定芽诱导率和生长状况，筛选最佳发芽诱导培养基。
1．2．4 增殖培养基筛选
待幼苗长至35cm时即可进行转接，切取万寿菊高度不小于1.5cm，转入添加不同浓度的6BA和NAA的MS培养基中（见表4），每组20个外植体，定期统计各组不定芽诱导率和生长状况，筛选最佳不定芽诱导培养基。
1．2．5 生根培养基筛选
选取生长健壮的组培苗，转接到添加不同浓度的IBA和NAA的1/2MS培养基（见表5）中进行生根培养，定期统计各培养基生根情况，筛选出最佳生根培养基。
1．2．6 秋水仙素诱导浓度筛选
选取生长健壮的植株，切取其顶芽或腋芽，浸泡在秋水仙素溶液中（见表7），每个处理组30个芽，置于摇床上，分别处理12h、24h、36h。到时后，用无菌水冲洗5次，吸干水分，接入MS培养基，定期统计万寿菊生长情况。
1．2．7 多倍体株系鉴定
形态鉴别：从植株大小、叶色、叶面积、气孔、保卫细胞中叶绿体数目、生长状况等相关的外部特征来初步筛选变异植株。
根尖染色体鉴定：待根长至1.02.0cm时，切取根尖0.5cm，冰水混合物浸泡1224h，卡诺试剂常温固定1224h，蒸馏水清洗至无醋酸味，加1molL1的盐酸，在60℃的水浴中解离1015min，用蒸馏水清洗干净，置于载玻片上，滴加品红溶液染色30min，盖上盖玻片，用滤纸吸取多余染液，用铅笔橡胶头轻轻敲打盖玻片，在显微镜取分裂中期图像进行观察。万寿菊二倍体植株染色体数目为2n=2x=24条，四倍体植株染色体数目为2n=2x=48条。
2 结果与分析
本研究试验所用的培养基如下表1。

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