目的本研究通过比较两种不同花色杭菊类型中花色苷和类胡萝卜素含量，分析其主要差异成分的代谢途径，来初步探究杭菊花色变异机制。方法通过比色法测定花色苷和类胡萝卜素的含量，使用荧光定量PCR测定两种杭菊在不用开放时期的类萝卜素中相关基因表达量。结果两种杭菊中的花色苷含量无显著差异，而类胡萝卜素含量却有显著差异；CmCCD4a表达量在花蕾期与花朵期都存在显著差异，而CmCCD4b表达量差异不显著。结论结果表明CmCCD4a的表达差异造成类胡萝卜素含量在两种杭菊类型中的积累情况不同，这是造成花色不同的主要原因。
目录
摘要1
关键字1
Abstract1
Key words 1
引言1
1 材料2
1.1 样品2
1.2 仪器与试剂2
2 方法2
2.1 花色苷的提取与总含量的测定2
2.2 类胡萝卜素的提取与总含量的测定3
2.3 总RNA的提取与cDNA的合成 3
2.4 早小洋菊与金菊1号CCD基因表达量的测定3
2.5 数据分析4
3 结果分析4
3.1 RNA提取质量4
3.2 不同杭菊类型头状花序中的总花色苷含量的比较4
3.3 不同杭菊类型头状花序中的总类胡萝卜素含量的比较5
3.4 不同杭菊类型头状花序CmCCD基因表达量的对比5
3.4.1 不同杭菊类型头状花序CmCCD4a基因相对表达量的对比6
3.4.2 不同杭菊类型头状花序CmCCD4b基因相对表达量的对比6
4 讨论7
4.1 花色苷与类胡萝卜素的热稳定性7
4.2 不同杭菊类型花色与总类胡萝卜素含量有关7
4.3 类胡萝卜素的积累7
致谢8
参考文献8
不同杭菊类型花色相关代谢途径研究
引言
药用菊花为菊科植物菊花Chrysanthemum morifolium Ramat. 的干燥头状花序，依药材产地和加工方法的不同，可药用菊花分为“亳菊”、“滁菊”、“贡菊”、“杭菊”、 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
“怀菊”等[1]。由于长期独立引种栽培，栽培菊花品种间在植物学性状和活性成分上存在差异，杭菊、贡菊、亳菊和怀菊的药用功效在具体方面存在差异。例如，杭菊具有清热散风、解毒，平肝明目等功效，亳菊具有疏风散热、解暑明目的功效[2]。药用菊花的花色因品种而异，不同的杭菊栽培品种之间在形态与质量方面都有一定的差异，郭巧生等[34]从早小洋菊优良芽变株系中选育的新品系金菊1号，金菊1号的花为金黄色，而早小洋菊的花为玉白色。根据中医基础理论中药炮制加工学可知，同一味中药的花色、气味不同，其主要作用不同，则推测黄色的药用菊花偏于疏散风热，白色的菊花偏于清肝明目。菊花花色的形成与诸多因素有关，花瓣内部结构或表皮细胞、花色素种类及含量、细胞液pH值和金属离子、花发育阶段、植物激素、等多种因素有关，同时花色也与人为、光温水等生态因子、矿质元素、糖类、真菌等因素的有关[56]。但是植物形成不同花色的根本原因是花色素种类和含量之间存在差异，研究表明了决定花色的花色素种类主要为：类胡萝卜素、黄酮类化合物、花青素和甜菜色素等[78]。花色苷是花青素与糖通过糖苷键形成的类黄酮类化合物，并且花色苷是比较稳定的存在于植物中，多被研究其对植物花、果实颜色的形成的影响。苏媚[9]研究得出黄色菊花花瓣内主要含有类胡萝卜素和黄酮类化合物；白色菊花花瓣内主要含有黄酮类化合物；红色和紫色的菊花颜色主要是花色素苷和黄酮类化合物共同决定；而橙色菊花的色素包含种类较多，比如花色素苷、黄酮类化合物和类胡萝卜素。类胡萝卜素积累到一定浓度后花瓣呈现出黄色、橙色。陆晨飞[10]的研究表明不同色系菊花间类胡萝卜素总含量差异极大，白色系、粉色系菊花品种只含有微量的类胡萝卜素，而黄色系、红色系菊花品种含有大量的类胡萝卜素。类胡萝卜素裂解双加氧酶（CCDs）降解大部分类胡萝卜素，形成α紫罗酮、β紫罗酮、独脚金内酯等，参与植物器官花，果实，叶等的呈色[11]。目前在植物中发现的CCD家族共12种，其中CCD亚家族中的CCD4的表达是控制菊花花瓣类胡萝卜素含量的关键酶[1213]。本次研究的材料为两种花色不同的杭菊，通过比较其花色苷和类胡萝卜素含量及其代谢途径，来初步探究早小洋菊与金菊1号花色变异机制。
1 材料
1.1 材料
本研究材料采自于大学药用菊花种质圃，经大学中药材研究所郭巧生教授鉴定为杭菊品系中的早小洋菊与金菊1号。每个品系各设3组，每组3个重复。参照郭巧生等[14]药用菊花头状花序开放程度的标准，将杭菊开花期分为花蕾期与花朵期，花蕾期时的标准为舌状花开放程度为30%，管状花未开放，花朵期时的标准为舌状花开放程度为70%，管状花开放程度为50%。分别采摘花蕾期与花朵期生长一致的头状花序，一部分用液氮将样品速冻后，放于80℃冰箱保存备用；另一部分蒸后低温烘干后备用。
1.2 仪器与试剂
千分之一天平（上海良平仪器仪表有限公司）；LGJ12冷冻干燥机（北京松源华兴科技发展有限公司）；JBQZD16全温振荡器（常州普天仪器制造有限公司）；Alpha1506型紫外可见分光光度计（美国Alpha公司）；ABI StepOne RealTime PCR仪（美国ABI公司）；PTC200 PCR仪（美国Alpha公司）。植物RNA提取试剂盒（TaKaRa MiniBEST Plant RNA Extraction Kit）、超微量分光光度计（杭州奥盛仪器有限公司）、定量用反转录试剂盒（PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser）购自宝生物工程（大连）有限公司、荧光定量试剂盒（2 × T5 Fast qPCR Mix（SYBR Green I））购自北京擎科新业生物技术有限公司；寡核苷酸引物由生工生物工程（上海）股份有限公司。
2 方法
2.1 花色苷的提取与总含量的测定

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