目的利用正交试验设计，分析不同磷、铁配施对活血丹药材品质的影响，为活血丹规范化栽培提供理论依据。方法以活血丹扦插苗为实验材料，测定磷（0、0.3、0.6、0.9、1.2 g·kg-1）、铁（0、0.12、0.24、0.36、0.48 g·kg-1）二因素五水平正交试验处理后活血丹药材品质差异，总黄酮含量用分光光度法测定，熊果酸、齐墩果酸、绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸含量用HPLC法测定。结果磷铁配施对活血丹醇溶性浸出物、总黄酮、绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸、齐墩果酸以及熊果酸有显著的影响，两因素对活血丹内在品质的影响磷高于铁。由方差分析可知，磷、铁元素交互作用是影响活血丹内在品质的主效因子。结论适宜活血丹内在品质形成的磷铁配施组合为磷0.6 g·kg-1、铁0.24 g·kg-1。
目录
摘要 3
关键词 3
引言 3
Abstract 3
Key words 3
1 材料与方法 4
1.1 供试材料 4
1.2 试验设计 4
1.3 活血丹指标性成分测定方法 4
1.3.1 醇溶性浸出物测定 4
1.3.2 总黄酮测定 4
1.3.3 酚酸类测定 5
1.3.4 三萜酸类测定 5
1.4 数据处理 6
2 结果与分析 6
2.1 磷、铁配施对活血丹醇溶性浸出物含量的影响 6
2.2 磷、铁配施对活血丹总黄酮含量的影响 7
2.3 磷、铁配施对活血丹酚酸类含量的影响 7
2.4 磷、铁配施对活血丹三萜酸含量的影响 9
2.5 磷、铁配施对活血丹内在品质的方差分析 10
3 结论与讨论 11
3.1 活血丹醇溶性浸出物的积累与不同磷、铁配施的相关性 11
3.2 活血丹总黄酮的积累与不同磷、铁配施的相关性 11
3.3 活血丹酚酸类的积累与不同磷、铁配施的相关性 11
3.4 活血丹三萜酸类的积累与不同磷、铁配施的相关性 12
致谢 12
参考文献 12 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 

不同磷、铁配施对活血丹内在品质的影响
引言
活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.为唇形科活血丹属植物，干燥地上部分为连钱草，味辛、微苦，性微寒；归肝、肾、膀胱经；具有利湿通淋，清热解毒，散瘀消肿的功能效用；用于治疗热淋，石淋，湿热黄疸，疮痈肿痛，跌打损伤等症[1]；是江西、广州等地区制药企业生产“排石颗粒”的主要成份。活血丹除西藏、新疆、青海、甘肃外，全国各地区均有分布，但主要分布在江浙一带，江苏为其道地产区之一。据学者研究报道[26]，活血丹主要含有黄酮和黄酮苷类、萜类、有机酸类、挥发油类、甾体类、醇类等化学成分，其中黄酮和黄酮苷类包括木犀草素、木犀草素7O葡萄糖苷、芹菜素、芫花素、槲皮素、连钱草酮等；萜类有三萜酸类的齐墩果酸、熊果酸等；有机酸类包括绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸等酚酸类化合物。
磷是植物完成代谢反应等生长发育过程所必需的营养元素之一，其不仅是植物中重要化合物（核酸，植素，卵磷脂）的组成成分，而且在植物的生命活动过程（光合作用，能量代谢，糖分代谢，酶促反应）中发挥着重要作用，在很大程度上决定了植物的产量和品质[7]。植物不仅需要从环境中吸收充足的磷，更需要磷在植物体内高效参与生物化学作用以保证其完成生命周期并提高产量和品质。虽然土壤中含有大量磷，但80%的磷均以有机态的形式存在，而土壤中的铁铝氧化物以及碳酸盐化合物极易吸附固定可溶性磷酸根离子，而导致植物难以吸收并利用磷。因此，植物组织中的磷浓度远远高于土壤中的可溶性磷浓度[8]。而铁作为植物发育所必需的微量矿物元素，在植物体的光合呼吸作用、氮的固定、蛋白质和核酸的合成等许多代谢过程中有着不可或缺的作用[9]。在长期的进化过程中，植物演变出一套完美的吸收、运输和代谢铁的分子调控系统，以从外界获取植物所必需的铁元素的同时又避免吸收过量而造成毒性[10]。课题组前期研究表明，磷、铁与活血丹药材生长和品质形成有一定相关性。本文旨在研究不同磷、铁浓度配施对活血丹内在品质的影响，寻求适合活血丹指标性成分积累的最佳配施浓度，以期完善活血丹栽培技术、保障药材品质。
1 材料与方法
1.1 供试材料
供试植物唇形科活血丹属植物活血丹G. longituba由大学中药材研究所郭巧生教授鉴定。2018年6月于大学中药材研究所大棚扦插育苗，7月选择长势统一的健壮活血丹幼苗进行栽培试验。10月初采收活血丹地上部分后，洗净、自然晾干，设置烘箱为55℃烘干至恒重，打粉机打粉后过60目筛备用。
1.2 试验设计
供试园土取自南京紫金山，晒干后过0.5 mm筛留用。供试园土、蛭石和珍珠岩以3∶1∶1的比例搅拌均匀（园土中磷含量0.57 gkg1、铁含量27.68 gkg1），等量（1.3 kg）装入高18 cm，直径12 cm花盆；每盆移栽5株大小一致的活血丹幼苗。设计两因素五水平的完全交互实验，其中设磷元素施加浓度为因素A，铁元素施加浓度为因素B，二者分别以磷酸二氢钠（NaH2PO4）和乙二胺二邻羟苯基乙酸铁钠（EDTHAFeNa）的形式添加，试验设计详见表1。缓苗后，如表1所示施加磷、铁元素。每个处理设3次重复，试验期间栽培管理措施保持一致。
1.3 活血丹指标性成分测定方法
1.3.1 醇溶性浸出物测定 按照《中华人民共和国药典一部》醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法进行测定，用50%乙醇作为溶剂。取活血丹样品粉末精密称定1.00 g，置于100 mL的锥形瓶中，加入50%乙醇50 mL，密塞后称重，静置1 h，热回流1 h。冷却再称重，用乙醇溶液补足重量后过滤。精密取滤液25 mL于蒸发皿中，水浴锅上蒸干溶液，105℃的烘箱中干燥3 h，冷却后精密称重。醇溶性浸出物的含量（%）以干燥品计算样品中所含量。
1.3.2 总黄酮测定 标准曲线制定：精密取芦丁对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.2、1.6 mL分别置于25 mL容量瓶中，加入8 mL 1.5%氯化铝溶液和4 mL pH5.5的醋酸钠醋酸缓冲液后用60%乙醇定容。以60%乙醇为对照，420 nm波长下进行扫描，并对芦丁含量和吸光光度值进行回归处理，绘制标准曲线（y = 0.9716x + 0.0162，R2 = 0.9961）。样品测定：精密称取活血丹干燥粉末0.1 g于10 mL离心管中，加入6 mL 浓度为60%乙醇溶液，超声下提取80min。取出静置使之冷却至室温，并在25℃、4000 rmin1条件下离心10 min。上清液即为活血丹样品液，精密量取样品液1 mL置于25 mL容量瓶中，加入8 mL 1.5%

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