目的研究金线莲在有菌和无菌生长条件下生长情况的差异，为确定金线莲的最适生长条件奠定基础。方法以无菌金线莲幼苗为材料，分别用阔叶林腐殖质土、蛭石和MS培养基栽培，确定在不同栽培基质条件下，金线莲生长发育及有效成分的差异。结果培养基栽培的、林土栽培的、蛭石栽培的金线莲总黄酮含量程由高到低的趋势；林土栽培的、蛭石栽培的、培养基栽培的金线莲多糖含量和生长指标程由高到低的趋势。林土栽培的金线莲无菌研磨液在PDA培养基上长出真菌，而培养基栽培的没有。结论金线莲作为兰科植物，自身条件下发育困难，需要和内生真菌组成共生关系来吸收营养。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words. 1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1 试验材料 2
1.2 试验方法 2
1.2.1 外植体灭菌方法 2
1.2.2 PDA培养基的配制及内生菌的培养 2
1.2.3 总黄酮含量的测定 2
1.2.4 多糖含量的测定 2
1.3 测定项目 3
1.4 数据处理 3
2 结果与分析 3
2.1 不同栽培基质对金线莲总黄酮含量的影响 3
2.2 不同栽培基质对金线莲总多糖含量的影响 3
2.3 不同栽培基质对金线莲酶活性的影响 4
2.4 不同栽培基质对金线莲生长指标的影响 4
3 讨论 4
3.1 真菌对兰科植物的影响 4
3.2 真菌对金线莲的影响 5
3.3 光照强度对植物的影响 5
3.4 光照强度对金线莲的影响 6
结论 6
致谢 6
参考文献 6
栽培基质对金线莲有效成分的影响
引言
金线莲(Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl)作为兰科(Orchidaceae)开唇兰属(Anoectochilus)花叶开唇兰种的多年生草本植物，民间别名又称金线兰、鸟人参、金线入骨 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
消等[1]，整棵植株都可以入药，作为一种珍贵药材，在我国民间南方地区使用比较广泛，随着金线莲的知名度越来越大，并且具有清热平肝、凉血解毒、祛风利湿、降血压等功效[2]，金线莲的商业价值与日俱增。金线莲的植株小巧，叶子上有金色的网状叶脉结构，所以叫做金线莲。金线莲的生长对环境要求很高，喜热喜阴，主要分布在亚热带和热带地区[3]。中国、印度、日本、尼泊尔及东南亚各国均有分布[4]。在我国主要分布在福建、台湾、两广、闽南地区[5]。
在植物的生长发育过程中光、温、气、水等环境因子起着很重要的影响作用，尤其是光因子，它既为植物提供能量来进行光合作用，又作为一种信号来调节植物整个生长过程，如种子的萌发、花芽的分化以及器官的衰老等过程[6,7]。金线莲是喜阴植物，光照强度和光照时间对金线莲的品质优劣影响很大，控制光照条件相同十分重要。品质相同的金线莲在其他变量不变的情况下，在林土栽培和培养基无菌栽培下，具有十分显著的生长差异。郭顺星等[8]采集来自福建各地的野生金线莲，并根据多年研究兰科植物和内生菌的共生关系的经验[9]，从根中分离出多种菌根真菌，得出结论自然状态下野生金线莲虽然可以进行光合作用，但仍需与合适的内生菌形成共生关系才能更好的吸收营养来发育[10]。
探讨金线莲在阔叶林腐殖质土里生长和培养基里生长的有效成分的差异，目的在为金线莲的生长环境提供依据。
材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.2.1 外植体灭菌方法 用自来水反复冲洗金线莲幼苗，洗去根部残留杂质，用1%的次氯酸钠溶液浸泡并搅拌15 min，然后先用硫代硫酸钠溶液冲洗2次、70%的乙醇冲洗2次、无菌水冲洗3次。在干燥无菌的滤纸中用解剖刀将一部分金线莲接种到已经灭菌好的MS培养基中，剩下的一部分用腐殖质土移栽在盆中，一部分用蛭石移栽于盆中。
1.2.2 PDA培养基的配制及内生菌的培养 取无皮土豆200 g，切成小块倒入锅中，加水1000 mL，加热至沸腾后，小火煮20~30 min，用2层纱布趁热过滤，扔掉滤渣，只留滤液加水到1000 mL。把滤液倒进锅内，加入20 g葡萄糖，15~20 g琼脂，用小火加热，再加入适量水，然后分装至培养皿中，高温灭菌，放凉凝固。
用自来水反复冲洗植物材料，用1%的次氯酸钠溶液浸泡10 min，再依次用硫代硫酸钠溶液、70%的乙醇溶液、无菌水冲洗，对金线莲材料进行无菌研磨，加入少量无菌水，将研磨汁涂在平板培养基上，放入培养室培养。
1.2.3 总黄酮含量的测定 用芦丁做标准品，准确称量芦丁标准品4.0 mg，加入乙醇溶液溶解，再定容至10 mL，配成0.4 mg/mL的标准溶液。分别吸取标准溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL到10 mL容量瓶中，用乙醇定容，摇匀。分别取1 mL配制好的芦丁标准溶液稀10 mL，加入1%三氯化铝溶液0.5 mL，再加入2.0 mL30%乙醇，振荡摇匀，静置15 min让其反应充分，然后在420 nm波长下测定吸光度值，以吸光度（A）为横坐标，芦丁浓度（mg/mL）为纵坐标制作标准曲线。
y = 2.6104 x 1.1579，R2 = 0.9946
精确称取500 mg金线莲粉末，置具塞锥形瓶中，精确加入无水乙醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理2 h，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得，存于4℃冰箱保存[11]。
精确吸取样品液1.0 mL，按上述显色方法测定吸光度，按照标准曲线计算金线莲的总黄酮含量。
1.2.4 多糖含量的测定 称取3 g无水葡萄糖粉末，放入烘箱里干燥至恒重，再称取1 g干燥后的无水葡萄糖，用蒸馏水定容至100 mL容量瓶里，再从其中吸取1 mL该溶液在100 mL容量瓶内定容，作为葡萄糖标准溶液待用。分别准确吸取葡萄糖标准品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于试管中，分别加入蒸馏水至1.0 mL，再加2.0%的苯酚溶液1.0 mL，浓硫酸5.0 mL，沸水浴2 min，取出放凉至常温，在490 nm波长处测定吸光度。以吸光度为x轴，葡萄糖浓度为y轴绘制标准曲线。

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