1为探讨影响甜叶菊叶片抗氧化能力的组分及其抗氧化机制，并为甜叶菊抗氧化组分开发应用提供依据，在利用液质联用技术对甜叶菊叶片1003种醇溶性化学组分进行分离测定的基础上，多元回归分析与甜叶菊叶片抗氧化能力密切相关的化学组分。结果表明，43种甜菊糖类组分中与甜叶菊总抗氧化能力密切相关的有7种；影响甜叶菊97.2%总抗氧化能力的醇溶性组分共有90种。本文针对前10种与总抗氧化能力相关度较强的组分进行比较分析，联合质谱图及紫外可见光光谱图推测得出抗氧化能力较强的组分部分为绿原酸类化合物。为探究甜叶菊中抗氧化活性成分提供了基础，也为进一步促进甜叶菊的开发利用，使其更好地实现在食品、药品等领域的应用价值做出了贡献。
目录
引言
甜叶菊(Stevia rebaudiana (Bertoni)Hemsl.)，是菊科(Compositae)多年生草本植物，原产于巴西，在我国已有四十多年的种植历史，并在全国范围内27 个省市(包括北京市、河北省、陕西省、江苏省、福建省、湖南省、云南省等）大面积种植[1]。甜叶菊可作为茶叶直接饮用，是优质的药食两用植物。且甜叶菊含有多种微量元素和营养成分，甜叶菊所含的天然活性物质在降血糖、降血压、提高免疫力、抗氧化、抑菌等方面发挥着重要作用，现已应用在新糖源、食品、药品和饲料添加剂等领域[2]。
人体氧化过程是必不可少的，氧化反应可以产生代谢所需的能量，但同时呼吸（氧化反应）、外界污染、放射线照射等因素，也使人体内不断的在产生自由基。而癌症、衰老或其它中老年慢病（如心血管疾病、糖尿病）等，很大程度上与自由基的产生过量有关。抗氧化是抗氧化自由基的简称，研究抗氧化可以有效克服上述自由基产生过量所带来的危害，所以抗氧化被很多保健品、化妆品企业列为重要的研发方向之一，也是市场最重要的功能性诉求之一。
近年来，随着人们对健康保健重视程度的逐渐加深，具有抗氧化能力的食物、产品越来越受到人们的关注和青睐。甜叶菊中含有甜叶菊糖苷，具有高甜度、低热量的特性，因此日益引起人们的关注和重视，被誉为最有发展前途的新糖源。然而，甜叶菊除了含有高含量的甜菊糖苷外，还含有丰富的色素、蛋白质、鞣质、酚酸类和黄酮类成分[3]。现代研究表明，黄酮、酚酸类具有良好的抗氧化活性，能帮助机体降低氧化反应带来的损伤，在延缓衰老，防 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
治自由基引起的疾病和辅助治疗炎症性疾病等方面具有积极作用[4][5]。研究甜叶菊抗氧化成分可以为后期提取相关抗氧化物质基础提供参考。因此，对甜叶菊抗氧化物质基础及抗氧化能力的研究具有重要意义。
目前对于甜叶菊的研究及应用主要集中在甜菊糖苷的提取纯化、用甜叶菊糖代替蔗糖以及作为食品药品添加剂应用等方面。而对甜叶菊中各组分对抗氧化能力影响程度差异等方面的分析研究较少。本研究首次针对甜叶菊中各组分对总抗氧化能力的贡献差异进行分析，阐明甜叶菊叶片总抗氧化相关的物质基础，进一步促进甜叶菊的开发利用，使其更好地实现在食品、药品等领域的应用价值。
1 材料与方法
1．1 材料、试剂与仪器
1.1.1 材料 甜叶菊材料采集于江浦实验站，采集时该植物正处于现蕾期。
1.1.2 试剂 甲酸（ROE,LCMS级）；乙腈（Tediacompany Inc, absolv）；莱鲍迪苷D (Rebaudioside D, RD)、莱鲍迪苷M(RebaudiosideM, RM)、莱鲍迪苷A(Rebaudioside A, RA)、甜菊苷(Stevioside, STV)、莱鲍迪苷F(Rebaudioside F, RF)、莱鲍迪苷C(RebaudiosideC, RC)、杜克苷A(Dulcoside A, DA)、甜茶苷(Rubusoside, Rub)、莱鲍迪苷B(Rebaudioside B, RB)、)等标准品购于ChromaDex；双糖苷(Steviolbioside, SB)，总抗氧化能力测定试剂盒 购自南京建成生物工程研究所；实验用水为超纯水。
1.1.3 仪器 安捷伦1200高效液相色谱仪；色谱柱ACE Ultracore 2.5 SuperC18柱（150 mm×4.6 mm, 粒径2.5 μm）(广州菲罗门科学仪器有限公司)；液质联用仪Agilent 1260 UPLCDAD6530 ESIQTOF MS；Multiskan Go 全波长酶标仪（Thermo Scientific 公司）；JH3102电子天平（上海精科天美科学仪器有限公司）；TD—214电子分析天平（北京丹佛仪器有限公司）；HWS—12恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）。
1.2 甜叶菊总抗氧化能力研究
1.2.1 甜叶菊提取物的制备 将200份新鲜甜叶菊叶片80°C烘干，于打粉机中充分机械打粉，以破碎细胞。分别称取10 mg 样品粉末至于离心管中并加入1.5 mL超纯水，摇匀。将其批量置于80℃水浴锅内热水提取2 h后以12000转/分离心5 min，取上清液，稀释三倍后得样品溶液。
1.2.2 总抗氧化能力的测定 标准曲线的测定：称取 试剂盒中FeSO47H2O 27.8 mg ，经计算溶解后定容到 1 mL时浓度即为100 mM。取适量 100 mmol/L FeSO4溶液稀释至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5 mmol/L。 测试各个浓度的 OD 值，绘制标准曲线。
总抗氧化能力测试：采用FRAP法测定甜叶菊叶片的总抗氧化能力，于 96 孔板中加入 180 μL FRAP 工作液（检测缓冲液：基质液：底物液=10：1：1），随后加入5 μL的样品溶液，混匀，于 37 ℃孵育 3~5 min，测试在 593 nm 处 OD 值，每个样品重复三次[6]。根据标准曲线计算样品的总抗氧化能力，即将所测得OD平均值代入标曲求得FeSO4 当量浓度。
1．3 液质联用法分离甜叶菊叶片中抗氧化成分

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