半夏无菌快繁体系的建立【字数：8157】
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key Words1
引言1
1 材料与方法1
1.1 实验材料2
1.2 实验方法2
1.2.1 外植体的消毒2
1.2.2 配置培养基2
1.2.3 适宜的培养条件2
1.2.4 愈伤组织的诱导2
1.2.5 不定芽的诱导2
1.2.6 增殖培养2
1.2.7 生根诱导2
2 结果与分析2
2.1 愈伤组织的诱导情况3
2.2 不定芽的诱导情况3
2.3 增殖情况3
2.4 根的诱导情况4
2.5 污染情况4
3 讨论5
3.1 半夏繁殖方式及其影响5
3.2 半夏外植体的选择5
3.3 半夏组培时培养基的选择6
3.4 半夏组培中常见的问题及解决方法6
3.5 组培苗的移栽驯化7
3.6 半夏组培的新发展7
4 总结7
致谢8
参考文献8
半夏无菌快繁体系的建立
学生 施怡娜
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引言
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 实验方法
1.2.1 外植体的消毒
取半夏的块茎，提前一天用流水洗净表面的泥土和灰尘等。清洗干净以后块茎要先剥去外表皮，然后再用清水洗净。将块茎放入抑菌剂中处理2h左右，然后开始进行消毒。先用75%酒精浸泡710s，取出在无菌水中涮34次，然后将块茎放入0.1%升汞溶液中浸泡510min，然后再在无菌水中涮34次。此流程均在无菌操作台上进行，过程中需要使用的小刀、镊子等操作工具也要在操作前用高压蒸汽灭菌法消毒，在使用前还要用牛皮纸包裹后在紫外灯下消毒15min。
1.2.2 配置培养基
将消毒过后的块茎切成小块，转入加有不同外源激素的MS培养基中。MS培养基中加入不同浓度的2,4D、6BA、NAA、KT等植物生长调节剂，琼脂粉7.5g/L，蔗糖30g/L。
1.2.3 适宜的培养条件
接种后置于培养室内培养，培养室温度为25±2℃，相对湿度为60%，光强为2000lx，光照时间为12h/d。
1.2.4 愈伤组织的诱导
在MS培养基中加入不同浓度的6BA和2,4D，将外植体接种在培养基上，每种培养基接种10瓶，观察愈伤组织的诱导情况。
1.2.5 不定芽的诱导
在MS培养基中加入不同浓度的2,4D、6BA和NAA，将愈伤组织接种于其上，每种培养基接种10瓶，观察不定芽的诱导情况。
1.2.6 增殖培养
MS+0.1mg/L NAA+1.5mg/L 6BA用于不定芽的增殖培养。
1.2.7 生根诱导
在MS培养基中加入不同浓度的2,4D、KT和NAA，选健壮不定芽接种，每种培养基接种10瓶，观察生根情况。
2 结果与分析
半夏以无性繁殖方式为主的特点，虽然有繁殖迅速、对环境适应性高和繁殖系数高适合种质繁衍的优点，但珠芽繁殖在进行连续多代繁殖以后会发生严重的病毒害现象。在进行连续多代无性繁殖以后，可能由于半夏次生代谢产物的影响，半夏易受病毒侵染，导致叶片皱缩、植株矮化等问题，严重时会导致植株死亡，对半夏的产量和品质造成了严重危害。因此利用组织培养技术研究半夏脱毒和快速繁殖技术，以期解决半夏病毒害导致的产量和品质问题。
本研究进行半夏组织培养时利用的培养基是MS培养基，在本实验中MS培养基加入了不同的外源激素，希望能找出最适宜诱导半夏外植体脱分化形成愈伤组织的培养基、诱导愈伤组织生成不定芽或不定根的最佳培养基以及诱导不定芽生根的最佳培养基。
本实验中设计了以下几种培养基：①MS+1.0mg/L 2,4D+1.5mg/L 6BA②MS+1.0mg/L 2,4D+1.0mg/L 6BA③MS+0.2mg/L 2,4D+1.5mg/L 6BA④MS+0.2mg/L NAA+1.0mg/L 6BA⑤MS+0.1mg/L NAA+1.5mg/L 6BA⑥1/2MS+0.5mg/L NAA⑦1/2MS+2.0mg/L 2,4D+1.0mg/L KT。
实验前期望：从①号②号培养基中选出更有利于诱导形成愈伤组织的培养基，从③号④号中选出更有利于不定芽生成的培养基，⑤号培养基用作不定芽的增殖，从⑥号⑦号中选出更有利于生根的培养基。
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