本实验探究蚂蟥生长、性腺发育及内在品质受到恒温越冬的影响。实验中设置恒温越冬组与自然越冬组，利用石蜡切片技术观察蚂蟥雌雄性腺及精卵细胞的发育变化，越冬结束后对其生长状况及内在品质指标进行测定并统计存活率。结果显示，恒温越冬组蚂蟥体重为自然越冬组2.25倍；两组蚂蟥存活率均超过五分之四，蚂蟥的pH值、含水量、总灰分含量、酸不溶性灰分含量均无显著差异（P>0.05），恒温越冬蚂蟥抗凝血酶活性超过自然越冬组25%（P<0.01）；恒温越冬能促进蚂蟥性腺及生殖细胞发育，其中对雄性腺及精细胞发育的促进效果显著高于雌性腺及卵细胞，可解除精细胞休眠，促使其进入下一生殖周期。综上，在蚂蟥越冬期间提供21℃恒温条件，能够促进其生长和精卵细胞发育，并提高抗凝血酶活性。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
前言4
1□材料4
1.1□材料4
1.2□仪器4
2□方法 4
2.1□设计实验4
2.2□恒温对越冬蚂蟥生长的影响4
2.3□恒温对越冬蚂蟥内在品质的影响4
2.4□恒温对越冬蚂蟥性腺指数的影响5
2.5□恒温对越冬蚂蟥精卵巢组织形态的影响5
2.6□数据处理5
3□结果与分析6
3.1□恒温对越冬蚂蟥生长的影响6
3.2□恒温对越冬蚂蟥内在品质的影响6
3.3□恒温对越冬蚂蟥性腺指数的影响6
3.4□恒温对越冬蚂蟥精细胞发育的影响6
3.5□恒温对越冬蚂蟥卵巢组织形态的影响7
4□讨论8
4.1□恒温对蚂蟥越冬期间生长情况及其内在品质的影响8
4.2□恒温对蚂蟥越冬期间性腺发育的影响8
5□总结9
致谢9
参考文献10
恒温越冬对蚂蟥生长及性腺发育的影响
引言
前言
蚂蟥，又名宽体金线蛭（Whitmania pigra Whitman），是2015版《中华人民共和国药典》中药材水蛭的基原动物之一，以其干燥全体入药 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: &351916072& 
，具有破血通经的功效[1]，现于心脑血管疾病、糖尿病肾病等方面得到了广泛应用[2]。
蚂蟥属于水生变温动物，温度低于4℃时进入冬眠[3]，次年34月份，温度高于8℃时出冬眠活动。其生长和繁殖受到温度影响显著：25℃为蚂蟥产卵、孵化的最适温度[4]，生长温度则以2226℃为宜[5]，其中25℃温度下仔蛭生长最快[6]；蚂蟥消化道酶的最适温度高于其生长最适温度，脂肪酶、淀粉酶在37℃时活性最高，蛋白酶最适温度高达42℃[7]。
研究发现，蚂蟥精卵细胞并非同步发育，其精细胞开始增殖时，卵巢正处于形态发育阶段的形成期；当蚂蟥进入冬眠状态后，卵细胞处于生长期，而精细胞处于休眠状态；当气温升高出冬眠时，精卵细胞同步成熟、排放，并进入休止期[8]。
研究发现越冬条件可影响水生动物生长和性腺发育。用25μgL1外源雌二醇对越冬前蚂蟥进行短期处理，可在不抑制雄性性腺发育的同时，促进其生长与卵细胞发育，并可提高抗凝血酶活性[9]；而用1.0100. 0μgL1甲基睾酮对越冬前蚂蟥进行短期处理，不仅能促进其生长与生殖细胞发育，还可提高内在品质[10]。25 ℃恒温越冬条件下，泥鳅的体重及性腺指数增长均快于室外自然越冬[11]，降低或升高越冬期间的基础水温能够调节虾产卵时间[12]。蚂蟥生长、性腺发育及内在品质受恒温越冬的影响如何，目前尚未见报道。本研究对比蚂蟥自然越冬与恒温越冬条件下的发育情况，期望能揭示蚂蟥生长、性腺发育及内在品质受到恒温越冬的影响。
1 材料
1.1材料
大学中药材研究所提供的蚂蟥，经史红专副教授鉴定，确认为Whitmania pigra Whitman。牛纤维蛋白原、凝血酶（中国食品药品检定研究院，140626201310），乙醇，4%多聚甲醛，二甲苯，石蜡，伊红染液，苏木精染液。
1.2仪器
ZD2型自动电位滴定仪（上海仪电科学仪器股份有限公司），RM2015切片机、DFC450 C正置荧光显微镜（Leica公司）。
2 方法
2.1设计实验
2018年11月25日，选取体重约为6 g的健康同龄蚂蟥，随机分成自然越冬组与恒温越冬组，30瓶/组×6条/瓶。恒温越冬组蚂蟥用光照培养箱维持21 ℃环境温度，每天进行6 小时光照；自然越冬组放在不采取任何升温措施的室内。参考李蒙蒙[13,14]的研究结果进行日常养殖管理，每三天换水一次，并投喂螺蛳35个。每月25日对两组蚂蟥分别抽样进行组织切片，观察蚂蟥精卵细胞发育情况；2019年2月25日出冬眠后对其生长情况、出现、雌雄性腺指数及内在品质指标进行测定。
2.2恒温对越冬蚂蟥生长的影响
越冬结束后随机抽取自然越冬和恒温越冬蚂蟥各10条，称其体重，并统计两组蚂蟥存活率。
存活率(%)=（总数死亡数）÷总数×100%
特定生长率(%)=［ln最终体重－ln初始体重］÷试验天数× 100%
2.3蚂蟥内在品质的测试
2019年2月25日越冬结束后，从两组中各随机挑选出蚂蟥40条，低温阴干后，用于测定水分含量、总灰分含量、酸不溶性灰分含量、酸碱度、抗凝血酶活性等内在品质指标。
水分的测定：(2015版《中国药典》通则0832第二法[1]）取扁形称瓶，干燥至恒重，加入供试蚂蟥粉末25g，铺匀，精密称定；打开瓶盖，在100105℃烘箱中干燥5小时后，盖上瓶盖，将称瓶移入干燥容器中，冷却0.5小时，然后对其进行精密称定；相同条件下继续干燥1小时，冷却后再次精密称定重量；重复以上步骤至连续两次称量结果相差不超过5mg，依据减少的重量计算蚂蟥含水量。
含水量(%)=[初始重量(g)最终重量(g)]÷初始重量×100%
总灰分含量以及酸不溶性灰分含量的测定：(2015版《中国药典》通则2302[1]）坩埚灼至恒重，加35g蚂蟥粉末（过二号筛），精密称量；缓慢灼烧，直至蚂蟥粉末炭化且恒重，称量并计算灰分含量；加入10ml稀HCl溶液，盖表面皿水浴10分钟，用5ml热水冲洗表面皿，洗液倒入坩埚，残渣置无灰滤纸上，坩埚及残渣用水洗至无氯化物反应，将滤纸、残渣放回此坩埚，灼烧至恒重，精密称量并计算酸不溶性灰分含量。

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