老鸦瓣myb基因克隆及表达分析【字数：5496】
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.2 方法 2
1.2.1 总RNA提取 2
1.2.2 RNA的反转录及cDNA的获得 2
1.2.3 目的基因的克隆 3
1.2.4 中间载体的构建 3
1.2.5 转化 3
1.2.6 菌落PCR鉴定 3
1.2.7 生物信息学分析 4
1.2.8 TeMYB91基因的组织表达特异性分析 4
2 结果与分析 5
2.1 TeMYB91基因的克隆 5
2.2 TeMYB91的生物信息学分析 5
2.3 TeMYB91基因的组织表达特异性分析 7
3 讨论 8
致谢 8
参考文献 8
老鸦瓣MYB基因克隆及表达分析
学 生 王 娴
引言
MYB是植物中最大的转录因子家族之一[1]，广泛参与植物各器官的生长发育[2]。但目前关于MYB转录因子的研究在农作物方面较多，对药用植物方面的研究还相对较少。
老鸦瓣Amana edulis(Miq.)Baker是百合科(Liliaceae) 老 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: #351916072#
鸦瓣属(Amana)植物，它的干燥鳞茎是中药光慈姑。光慈姑味甘，性寒，有毒，具有行血化瘀、解毒散结的疗效[3]。根据植物志记载及实际调查结果，其主要分布于安徽、江苏、浙江等地[4]。近年来随着药用价值的开发，对光慈姑药材需求量剧增，光慈姑在临床上的应用越来越广泛，但老鸦瓣资源短缺，亟待开展老鸦瓣的人工栽培技术研究[5]。目前该研究刚刚起步，对老鸦瓣生长发育规律等方面的研究尚不清楚，尤其了解老鸦瓣芽茎发生机理对于其产业化栽培具有重要意义，其中MYB基因方面的研究几乎还是空白，有较大研究空间[6]。
近年来，随着生物技术的发展，研究发现的MYB类转录因子功能趋于多样化，在植物的生长发育过程中起到不可缺少的重要作用。但相关研究在药用植物领域相对较少，仍有大量空白领域等待探索[7]。老鸦瓣是重要的中药资源，具有较大的药用价值，面对资源短缺而市场加大需求的现状，探索其芽茎生长机理具有重要作用。前期研究表明，MYB转录因子可能在老鸦瓣芽茎发生过程中具有重要作用。因此，本研究开展老鸦瓣MYB基因克隆及表达分析，以期初步阐明MYB转录因子在老鸦瓣芽茎发生过程中的作用机理，以便能为产业化栽培提供依据，更好的发挥作用满足市场所需[8]。
1 材料与方法
材料
供试材料采于江苏省大学大棚，经郭巧生教授鉴定，为老鸦瓣A. edulis。于2020年1月收集健康植株的实验材料，包括老鸦瓣芽茎形成前期(T1，栽种后41d)、中期(T2，栽种后50d)、后期(T3，栽种后60d) 、鳞茎、叶、花，每一部位随机选取发育一致的样本（1015个），在液氮中速冻（80℃条件下）保存用于RNA的提取。
中间克隆载体p EASYBlunt，荧光定量PCR试剂盒，植物总RNA提取试剂盒、
cDNA反转录试剂盒，感受态大肠杆菌DH5a、胶回收试剂盒。
1.2 方法
1.2.1 总RNA提取
将冷冻后的老鸦瓣芽茎组织，放置于冲洗干净的研钵中，加入一定量的液氮，快速研磨样品，将样品磨成粉末状后，放入EP管（经液氮预冷）中[9]，提取各样品的总RNA（利用植物RNA提取试剂盒），随后进行各样品的纯度检测（于1%琼脂糖凝胶电泳中），进行RNA的纯度检测（利用紫外分光光度计），稀释合成的cDNA（按1：5的比例），后于20 ℃条件下保存备用[10]。
1.2.2 RNA的反转录及 cDNA 的获得
获得的RNA浓度检测合格之后，将总RNA反转录成cDNA（参考TaKaRa反转录试剂盒）。
(1）在一容器里冰上nucleasefree，然后按照表1中的添加量将试剂均匀混合；
(2）将以下试剂按顺序加入 1）中所获得的混合物里；
表1 cDNA 合成第一步混合的试剂
Table 1 Reagents mixed in the first step of cDNA synthesis
试剂
添加量
RNA 模板
1μg2μg
nucleasefree water
to 12μl
Primer
1μl
将表2中的试剂均匀混合并进行离心操作；
表2 cDNA 合成第二步混合的试剂
Table 2 Mixed reagents in the second step of cDNA synthesis
试剂
添加量
10m M dNTP Mix
2μl
RevertAid MMuLV RT(200U/μl)
原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/zyx/607325.html
