目录
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摘要及关键词 Ⅲ
ABSTRACT AND KEY WORDS Ⅳ
第一章 选题背景 1
1 课题来源 1
2 目的与意义 1
第二章 文献综述 2
第三章 方案论证 3
1 设计原理 3
2 方案选择 3
2.1 基因克隆方法 3
2.2 蛋白互作检验 3
第四章 过程论述 4
1 试验材料 4
1.1 菘蓝样品的准备 4
1.2 烟草样品的种植 4
1.3 菌种及载体的选择 4
2 仪器与试剂 4
2.1 仪器 4
2.2 试剂 4
3 试验方法 5
3.1 同源克隆IiAGL24基因 5
3.2 重组质粒的构建与转化 7
3.3 IiAGL24基因的生物信息学分析 7
3.4 RTqPCR定量检测 7
3.5 酵母双杂交技术 8
3.6 双分子荧光互补技术 10
第五章 结果与分析 12
1 IiAGL24基因的克隆 12
2 IiAGL24基因序列比对和进化分析 13
3 IiAGL24二级结构和三级结构的预测 16
4 IiAGL24的qRTPCR定量分析 16
5 酵母双杂交技术 17
5.1 酵母表达载体的构建 17
5.2 酵母质粒转化、毒性检测与诱饵蛋白自激活 18
5.3 酵母双杂交及其蛋白互作检测 18
6 双分子荧光互补技术 20
6.1 BiFC重组质粒的构建 20
6.2 BiFC鉴定AGL24和SOC1蛋白间的相互作用 19
第六章 讨论与结论 21
1 讨论 21
1.1 菘蓝AGL24蛋白结构属于的MADS Ⅱ基因的MIKC型 21
2 结论 21
2.1 AGL24序列较为保守，且参与菘蓝开花调控和花器 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072^ 
官发育 21
2.2 菘蓝 AGL24与SOC1蛋白全长存在相互作用 21
3 展望 22
3.1 菘蓝 AGL24与SOC1在功能上可能相互依赖又相对独立 22
3.2 AGL24的后续研究具有一定的理论基础与现实意义 22
参考文献 24
致 谢 26
附 录 27
附录A 缩略词（Abbreviation） 27
附录B 菘蓝SOC1的cDNA序列及其编码的氨基酸序列 28
获得学术成果 29
菘蓝开花基因AGL24的表达及与SOC1的蛋白互作
摘 要
【目的】分析AGL24基因在药用植物菘蓝生长阶段的表达特性及与开花调节因子SOC1的蛋白互作，初步探索AGL24在菘蓝开花过程中的分子机理。【方法】种植安徽亳州菘蓝居群，以其营养生长后期的叶片为试验材料，同源克隆得菘蓝AGL24基因编码区，并对其进行生物信息学分析；应用RTqPCR技术分析AGL24在菘蓝不同时期不同器官中表达量；通过酵母双杂交体系（Y2H）和双分子荧光互补技术（BiFC）验证AGL24和开花整合子SOC1之间的蛋白相互作用。【结果】菘蓝IiAGL24基因全长648 bp，编码215 个氨基酸，结构表现为MIKC型，与十字花科植物萝卜AGL24序列进化关系最近，同源性高达93.21%。IiAGL24在菘蓝各时期的茎叶及初花期的根中表达显著，且随植株进入生殖生长阶段迅速增加，但在花、花蕾和果实中低表达。Y2H和BiFC试验均激活报告基因，阳性结果可证实菘蓝AGL24和SOC1能够蛋白互作。【结论】AGL24在菘蓝的不同时期不同部位表达存在特异性，广泛表达于植物的根茎叶中，编码典型的MADS域蛋白，并与SOC1存在蛋白互作，在开花调控网络与花发育进程中具有较高研究意义。

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