不同炮制品阿胶多糖含量对比及其对小鼠免疫功能影响的研究
Key words: jelly raw products; clam powder fried gum; Puhuang fried gum; polysaccharide; immune function; ear swelling deg目 录
1绪论 1
1.1 阿胶的研究背景 1
1.2 阿胶的概述 1
1.2.1 阿胶的物理性质 1
1.2.2 阿胶的化学鉴别 1
1.2.3 阿胶的资源分布 2
1.3 阿胶化学成分研究 2
1.3.1 阿胶中总多糖 2
1.3.2 阿胶中所含的各类氨基酸 2
1.3.3 阿胶中所含的蛋白质类 3
1.3.4 阿胶中所含挥发类 3
1.3.5 阿胶中所含无机物类 3
1.3.6 阿胶中所含其他类 4
1.4 阿胶的药理方面 4
1.4.1 阿胶对血液疾病的作用 4
1.4.2 阿胶抗衰老的作用 5
1.4.3 阿胶抗肿瘤的作用 5
1.4.4 阿胶免疫调节的作用 6
1.5 阿胶的临床方面 6
1.5.1 补气血方面 6
1.5.2 安胎方面 6
1.5.3 滋阴方面 6
2 实验部分 9
2.1 仪器与试药 9
2.1.1 试剂及药材用量 9
2.1.2 实验仪器与设备 9
2.2 阿胶的三种炮制法及阿胶(多糖)提取的工艺 9
2.2.1 阿胶三种的炮制法 9
2.2.2 阿胶(多糖)提取的工艺 10
2.3 阿胶多糖提取以及含量对比 10
2.3.1 不同炮制品阿胶的多糖提取及对比 10
2.4 阿胶(多糖)对小鼠的免疫实验 11
2.4.1 蛤粉炒阿胶多糖的不同浓度的配制 13
2.4.2 空白组的制备 13
2.5 阿胶多糖对小鼠免疫功能的影响实验结果 13
2.5.1 蛤粉炒阿胶多糖对小鼠耳肿胀实验结 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072*
果 13
2.5.2 阿胶多糖对小鼠免疫功能的影响实验小结 13
结 论 15
参考文献 17
致 谢 21
1绪论
1.1 阿胶的研究背景
阿胶(Colla Corii Asini),是我们在临床中最为常见的一类补气血药,适用于女性居多,它是由驴的皮经过一系列熬制而形成的。阿胶之所以被称之为补药,是因为其成分中含有大量可被人体所吸收的物质,包括:胶原蛋白、维生素、多种微量元素。对阿胶的传统理解是具有较为缓和的药性,不燥,对人体有补益、润燥、止血的能力。中医经常用它来治疗由于血虚而导致的面部萎黄、眩晕心悸(主要是由于血虚所致)、血不足不能濡养四肢、女性的妊娠胎漏以及各种出血证(劳嗽吐血、尿血、便血等)[1]。从古至今,人们对阿胶的炮制的方法分为:蛤粉、滑石粉、蒲黄炒;蒲黄烘;烘法等。但本实验所研究的对比内容却很少涉及,所以针对阿胶生品、蛤粉炒和蒲黄炒的炮制方法,进行多糖的提取并进行含量测定,对比不同炮制品阿胶多糖的提取率,研究对小鼠免疫系统产生的影响,可以在临床应用方面对阿胶炮制品的选择提供一定理论依据。
1.2 阿胶的概述
1.2.1 阿胶的物理性质
阿胶(生品)为块状物,多为长形、方形。它的颜色多显现为棕色和黑褐色,有的颜色居于两者之间,具有光泽,它质地坚硬但是又很脆,切断后,其面细腻而且光亮,对着光照看呈现半透明的棕色。气微而味甜,非常容易碎,将其置于手掌里,敲击后即碎,将胶片置于阳光下。可以观察到它的断面光亮且有粗布纹理。
1.2.2 阿胶的化学鉴别
取出阿胶粉末(0.1g),然后加入碳酸氢铵溶液(浓度为1%,50ml),紧接着用超声波处理上述混合物30min,用实验室的过滤膜将混合物的滤液小心的进行过滤后,用吸管吸取100μl,并倒入进样瓶的里面,往里面加入可以分解阿胶的酶液(10μl),这里使用的是胰蛋白酶:(加碳酸氢铵溶液1%,配制成每1ml中含1mg的溶液),摇摆均匀后,在温度为37℃,恒温的条件下,进行酶解(12h),酶解后将其作为供试品溶液。另外再取阿胶对照药片0.1g,制成对照药材溶液。使用高效液相色谱质谱法(通则0512和通则0431)试验,使用十八烷基硅烷键合硅胶当填充剂(色谱柱内径为2.1mm);然后用乙腈作为流动相A,把 0.1%的甲酸溶液做为流动相B,进行梯度洗脱;我们经过实验总结发现当我们把流速控制在每小时16ml时,接着用质谱检测器设置成电喷雾正离子模式,进行多反应监测后,选择用质荷比(m/z)559.8(双电荷)→642.4和(m/z)589.8(双电荷)→963.8作为检测离子对。量取实验所需对比药材溶液,采样5μl,使用上面描述的方法检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比应该都大于3:1。
使用供试品溶液5μl,放入高效液相色谱质谱联用仪,测量判定。用质荷比(m/z)529.8(双电荷)→602.4和m/z549.8(双电荷)→973.8离子对提取的供试品所形成的色谱中,保留时间应与对照药材的相同。
1.2.3 阿胶的资源分布
阿胶在古代时生产于山东省的古东阿县(也就是现代山东省的阳谷县阿城镇)。
1.3 阿胶化学成分研究
1.3.1 阿胶中总多糖
驴皮中的有效成分为多糖这一物质,一直到现在,人们的专业技术水平也只能在阿胶提取物里准确有效的提取分离出硫酸皮肤素,(DS)中含有的对人体有药理作用的物质为糖胺聚糖,它和皮肤素相比,所不同的一点是它的形式为艾杜糖醛酸[2]。GAG是一种存在于动物组织里的直链多糖[3],它包括:氨基己糖、糖醛酸、异构化或硫酸化残基(以双糖单位重复构成的物质)。
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